175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására

25

175306

26

kapjuk. Fajlagos forgatóképessége [ajjy* = -7,3°

(c= 1,06, dimetil-formamidban).

Elemzési eredmények a C44H520,uNio • 2H20 képlet alapján:

5

számított: C = 57,637?, H =6,16%,

N = 15,28%,

talált: C =57,60%, H =6,10%,

N = 15,01%.

c) Z-0-Ala-Arg(N02 )-Sar—Phe-Phe—Tyr—NH2 előállítása

számított: C =54,53%, H =7,03%,

N = 14,79%,

talált: C = 54,99%, H =6,77%,,

N = 14,58%.

Aminosav-elemzés:

Arg: 1,00, Tyr: 0,88, Phe: 2,02,

0-Ala: 0,98, Sár: nem meghatározott (peptidtartalom 78,7%).

11. példa

7 ml 25%-os ecetsavas hidrogén-bromid-oldatban feloldunk a b) lépésben kapott vegyületből 15 700 mg-ot és 0,2 ml anizolt, majd a kapott oldatot szobahőmérsékleten 40 percen át rázzuk. A reakcióelegyhez ezután 100 ml dietilétert adunk, majd a képződött csapadékot kiszűrjük, dietiléterrel mossuk és nátrium-hidroxid szemcsék felett 2 órán át 20 szárítjuk.

A szárított csapadékot ezután 10 ml dimetil-formamidban feloldjuk, majd a kapott oldatot jeges hűtés közben trietil-aminnal semlegesítjük. 25

Ezt követően az oldathoz 336 mg Z-0-Ala—ONB-t adunk, majd 20 órán át keverjük. Ezután a dimetil-formamidot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a maradékhoz 50 ml vizet adunk. A 30 képződött port kiszűrjük, szárítjuk, végül pedig dimetil-formamid és etil-acetát elegyéből átcsapjuk, így 590 mg (76,5%) mennyiségben a 135-138 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk. Fajlagos forgatóképessége [a]” =-15,5° (c = 0,99, di- 35 metil-formamidban).

Elemzési eredmények a C47Hs 7 Oi 1N, 1 -H2 O képlet alapján:

számított: C =58,19%, H =6,13%, 4°

N = 15,89%,

talált: C =58,18%, H =6,40%,

N = 15,60%.

d) H-0—Ala—Arg—Sár—Phe—Phe—Tyr—NH2 30 * * * * * * * * * * * * * * 45

előállítása

30 ml ecetsavban feloldunk a c) lépésben kapott

vegyületből 450 mg-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 8 órán át 50

hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 5 ml vízben

feloldjuk, majd a vizes oldatot felvisszük egy

2,6 cm-szer 22 cm méretű, karboximetil-cellulózzal 55

töltött oszlopra. Az oszlopot ezután 700 ml

0,005 mólos és 700,ml 0,2 mólos vizes ammónium-acetát-oldattal gradiens-eluálásnak vetjük alá. A

770 ml és 880 ml közötti frakciókat összeöntjük,

majd liofilizáljuk. így 309 mg (70,4%) mennyiség- 60

hen fehér pelyhes csapadék formájában a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatoképessége [a]^2 = -21,5° (c = 0,46, vízben).

Elemzési eredmények a

39HS207Ni0 • 2C2H402 • 3H20 képlet alapján: 65

H-Leu-Arg-Pro-Phe-Phe-T yr-NH2 előállítása

a) Z—Leu—Arg(N02 )—Pro—Phe—Phe—Tyr—NH2 előállítása

20 ml dimetil-formamidban feloldunk 700 mg Z—Phe—PHe—Tyr—NH2-t, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 6, órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. Ezután a katalizátort kiszűrjük, majd a szűrletet lehűtjük. A szűrlethez először 648 mg Z—Leu—Arg(N02 )—Pro—OH-t, majd 247 mg HONB-t és 285 mg DCC-t adunk. A kapott keveréket 20 órán át keverjük, majd a kicsapódott diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és a dimetil-formamidot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékhoz 50 ml vizet adunk, majd a képződött port kiszűrjük, szárítjuk, végül pedig dimetil-formamid, etil-acetát és dietiléter elegyéből átcsapjuk. így 1,05 g (86,5%) mennyiségben a 110—111 °C olvadáspontu cím szerinti vegyületet kapjuk. Fajlagos forgatóképessége [a]“ = -38,1° (c = 1, dimetil-formamidban).

Elemzési eredmények a C52H6sOiiNn*2H2O képlet alapján:

számított: C =59,13%, H=6,59%,

N = 14,59%,

talált: C =59,24%, H =6,50%,

N = 14,62%.

b) H-Leu-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH2 előállítása

20 ml ecetsavban feloldunk az a) lépésben kapott vegyületből 500 mg-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 10 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 5 ml vízben feloldjuk, majd a vizes oldatot felvisszük egy

2,6 cm-szer 20 cm méretű, karboximetil-cellulózzal töltött oszlopra. Az oszlopot 700 ml 0,005 mólos és 700 ml 0,2 mólos vizes ammónium-acetát-oldattal gradiens-eluálásnak vetjük alá. A 700 ml és 790 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk. így 300 mg (63,6%>)' mennyiségben fehér pelyhes csapadék formájában a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]p2 = -58,3° (c = 0,59, vízben).

Elemzési eredmények a C44H6o07Nio* • 2C2H402 • 2H20 képlet alapján:

13