175217. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás biciklusos metiléterek előállítására
3 175217 4 Amennyiben olyan II általános képletü vegyületekből indulunk ki, amelyekben R jelentése hidrogénatomtól eltérő, úgy az acetálképzés után kapott epimer acetál-észterek például oszlopkromatográfiásan könnyen szétválaszthatok. Különösen előnyös, ha a II általános képletü vegyületekben R csoportként p-fe- 5 nil-benzoil-csoport szerepel. Ezesetben a metanollal történő acetálképzés után a reakcióelegyet könnyen oszlopkromatografálhatjuk szilikagélen vagy más szokásos adszorbensen eluálószerként előnyösen például izopropiléter-etilacetát elegyet alkalmazva. Az ősz- 10 iopkromatográfia során először a kevésbé poláros, „exo” metoxi-csoportot tartalmazó acetil-észter eluálódik, amely könnyen kristályosítható izopropfléterben petroléter hozzáadásával. A polárosabb „endo” epimer szintén tisztán izolálható, de nem kristályosít- 15 ható az „exo" epimerhez hasonló módon. Amennyiben a II általános képletü kiindulási vegyületben R jelentése hidrogénatom, azaz a vegyület egy triói, úgy az epimer metiléterek nem, vagy csak igen nagy nehézségek árán választhatók szét. Megfelelő fizikokémiai módszerekkel, például gázkromatográfiával, NMR spektroszkópiával azonban az epimerek jelenléte jól detektálható. Az I általános képletü vegyületek sztereokémiailag egységes termékként való 25 kinyerése, ha az R jelentése hidrogénatom, az esetek egy részében frakcionált kristályosítás alkalmazásával azonban megvalósítható,. mikoris az epimer elegy oldatából a jobban kristályosodó exo-metiléter-diói válik ki. 30 Az olyan 1 általános képletü vegyületek, melyekben R jelentése hidrogénatom, könnyen előállíthatok úgy is, hogy egy, az R helyén valamely fentiekben megadott acil-csoportot tartalmazó I általános képletű vegyuletet. amelyet előzetesen a 2-helyzetű meto- 35 xi-csoport vonatkozásában az epimerekre oszlopkromatográfiásan szétválasztottuk, hidrolízisnek illetve előnyösen alkoholízisnek vetünk alá. Legelőnyösebben úgy járhatunk el, hogy az észter-acetál-származékot metanolban kálium-karbonát jelenlétében kever- w tetiük, mikoris alkoholizissel a kívánt I általános képletü termékhez jutunk. Az 1 általános képletü vegyületek ismert képviselőit eddig csak mint a prosztaglandin-szintézis hasznos intermedierjeit kezelték, biológiai aktivitásukat eddig nem vizsgálták. Meglepő módon azt találtuk, hogy a találmány szerint előállított I általános képletü vegyületek igen előnyös biológiai aktivitással, így többek között kitűnő antiaggregációs tulajdonsággal valamint 50 tumorgátió hatással rendelkeznek. E vegyületek alkalmasak arra, hogy a humán trombociták különböző reagensekkel például adenozin-difoszfáttal vagy arachidonsawal kiváltott aggregációját 100/rg/ml- 100 pigmll koncentrációban alkalmazva megakadá- 55 lyozzák illetve felfüggesszék. Különösen előnyös ez a tulajdonság abból a szempontból, hogy e vegyületek fombocitaaggregáció gátló hatása szelektív és e vegvuieiek egyéb mellékhatással (különböző érfa], illetve simaizom kontrakciós hatások, vérnyomás- 60 emelő vagy csökkentő hatás) az adott koncentrációban nem rendelkeznek. Az aggregációgátló hatás vizsgálata: A vizsgálatokat humán trombocitadus plazmán vé- 55 geztük. 1 ml plazmát vizsgáltunk módosított Bornféle aggregométerrel. 1. ) A kontroli-minta aggregációiát lxlO"2 mól adenozin-difoszfáttal (ADT) váltottuk ki. 2. ) 79 /amól/ml (20 p/ml) (-)-2.3.3a/3,6a0-tetrahidro-2- eridö- 5oi-dihidroxi-4/J- (3/3- hidroxi-okt-1-transz - enil)-ciklopentano[b]furánt (I általános képletü vegyület, ahol R jelentése hidrogénatom) 0,05 mólos, 7,5 pH-ju TRIS-sósav-pufferben oldva 100 %-os gátlást okozott. Ugyanezen vegyület 39 /xmól/ml koncentrációban 38 %-os gátlást okozott. Tumorgátló hatás vizsgálata: Az I általános képletü vegyületek meglepő módon hatnak a tumorsejtek növekedésére. A biológiai hatást a tumorsejtek thymidin-3H beépülésével mért DNA- szintézisének a gátlásával vizsgáltuk Novikoff hepatoma illetve Yoshida ascites sarcoma sejteken in vitro körülmények között. Az állatokból a tumor átoltását követő 6. illetve 3. napon kiemeltük a tumorsejteket és 30 percig a vegyületek 10-100 ízg/ml koncentrációjú oldatával, majd 60 percig thymidin-3H prekurzorral inkubáltuk. A DNA-szintézist mindegyik vegyület gátolta 20-70 %-ban már 10 ptg/rrü koncentráció esetében is. A tumornövekedés gátlását Ehrlich ascites carcinoma esetében vizsgáltuk in vivo. A tumort 5 millió daganatsejttel oltottuk egérbe intraperitoneálisan. A kezelést az átoltást követő 24. órában kezdtük és naponta ismételtük 8 napon át intraperitoneálisan 1,2, és 4 mg/kg dózisokkal. Mindegyik vizsgált vegyület 150-200 % élettartam meghosszabbodást eredményezett. 1. példa (-)-2,3,3aj8,6a/?-Tetrahidro-2-exo- és -endo-metoxi-5a-(p-fenil-benzoiloxí(-4|3-(3(3-hidro xi-okt -1 -transz-enil)-ciklopentano[b jfurán. 500 ml-es keverővei ellátott lombikba bemérünk 22,6 g (50 mmól) (-)-23,3a/3,6a/3-tetrahidro-2-hidroxi-5a-)p-fenil-benzoiloxi(-4(3-(3|3-hidroxi-okt-l-transz-enil)-ciklopentano[b]furánt, hozzáadunk 203 ml (5 mól) vízmentes metilalkoholt, és szobahőfokon teljes oldódásig kevertetjük. Az oldódás után a reakciót 03 ml (5 mmól) koncentrált sósav-oldal beadagolásával indítjuk meg. Az átalakulás 10 perc alatt teljessé válik. Ezután 0,84 g (10 mmól) nátrium-hidrogén-karbonátot és néhány csepp vizet adunk a reakcióelegyhez, majd vákuumban töményítjük. A maradék sűrű olajat 1130 g szilikagélből készült oszlopon kromatografáljuk 9:1 arányú izopropiléter-etilacetát oldószerelegv eluens alkalmazásával. Az oszlopkromatográfia során az egyes frakciókat vékonyrétegkromatográfiásan vizsgáljuk. Itt eluensként 2:1 arányú izopropiléter-etilacetát elegyet használunk. Az előhívás foszformolibdénsavban történik. Az oszlopról először az exo-, majd az endo-epimer eluálódik. Ezeket különkülön oldószermentesre pároljuk. A kapott exo-epimer 14,4 g (62 %), míg az endoepimer 7,8 g (33,6%). A 14,4 g exo-epimert 15 ml izopropiléterben melegítéssel feloldjuk, majd óvatosan 60 ml petrolétert adagolunk az oldathoz. Az elegyet ezután 0°C-on kristályosítjuk. A kristályokat szűrjük, petroléterizopropiléter eleggyel fedjük, és szobahőmérsékleten szárítjuk. A kapott fehér tűs kristályok súlya 13,2 g. 2
