175202. lajstromszámú szabadalom • Eljárás diszulfidkötéses gyűrűt tartalmazó peptidek előállítására

175202

4, ciklus:

A kapcsolási reakciót as 5* ciklusnál leirt módon végezzük,ezsal a különbséggel, hogy reagensként 2,09 g /0,G057 mól/ BOC-L-glutamin-p-nitrofenilésztert használunk fel. Az acetilesést a 9» ciklusnál, a védőcsoport lehasitását pedig a 8. ciklusnál ismertetett módon hajtjuk végre.

3. ciklus:

A kapcsolási reakciót a 8. ciklusnál leirt módon hajtjuk végre, azzal a különbséggel,.hogy reagensként 0,88 g /0,C038 mól/ hOC-L-izoleucint használunk fel. A kapcsolási reakciót ezután IC ml diaetilíormamid és 10 ml. metilénklorid oldószer^ xelhasználásával megismételjük. Az acetilezést a 9» ciklusnál, a védőcsoport lehasitását pedig a 8. ciklusnál leirt módon végezzük.

2. ciklus:

Kapcsolás: A 3* ciklusban kapott gyantát 2x20 ml dimeti1- -formamiddal mossuk, majd a gyantát 2,11 g /0,00y7 mól/ BGC-0- -benzil-L-tirozin és 20 ml dimetilíormamid elegy éhez adjuk, és a szuszpenziót 10 percig keverjük. Ezután a szuszpenzióhoz 5,7 ml metilénkloridos diciklohexil-karbodiimid-oldatot /= 0,0057 mól diciklohexil-karbodiimid/ adunk, és a rendszert 16 órán át keverjük. A gyantát kiszűrjük, és 2-2 percig 20-20 ml dimetilíormamiddal, metilénkloriddal, metanollal, illetve metilénkloriddal mossuk.

Ezután a fenti kapcsolási reakciót megismételjük, azonban az aminosav-származék ás a diciklohexil-karbodiimid mennyiségét felére csökkentjük, és a rendszert csak 6 órán át keverjük.

Acetilezés: Az acetilezést a 9* ciklusnál le^rt módon hajtjuk végre.

A védő csoport lehasitása: A védőcsoportot a 9* ciklusnál ismertetett módon hasítjuk le.

1. ciklus:

A kapcsolási reakciót a 8. ciklusnál ismertetett módon hajtjuk végre, azzal a különbséggel, hogy reagensként 1,3 S /0,0033 mól/ BOC-G-/metexi-benzil/-L-cissteint használunk fel. Ezután a kapcsolást 0,0019 mól aminosav-származék felhasználásával megismételjük. A védőcaoport a 9* ciklusnál ismertetett módon hasítjuk le.

Ezután a gyantát 2-szer 20 ml n-hexánnal mossuk, majd elektromos fűtésű vákuum-szekrényben 24 órán át 40 C°-on, 0,1 Iigmm nyomáson száritjuk. Az igy kapott, védett oxitocin-prekurzort hordozó gyanta súlya 6,0 g.

Hidrogéníluoridos hasítás:

Egy Teflon-bélésű, Teflonnal bevont mágneses keverőt tartalmazó reakcióedénybe 2 g, a fentiek szerint szárított, peptidtartalmu gyantát és 2 ml anizolt mérünk be. A reakcioedényt szárazjég/aceton fürdőbe merítjük, és az edénybe 15 ml hidrogénfluor id- gázt kondenzáltatunk. A reakcióelegyet 1 óráin át jégí'ürdőn, 0 C -on keverjük, majd a hi drog énfluor időt csökkentett nyomáson lepároljuk. A maradékot 4-szer 25 ml etilacetáttal eldörzsöljük, majd a gyantaszemcsékről 2-szer 50 ml jégecettel leoldjuk a peptidet. Az extraktumot liofilizáljuk. 486 mg peptidet kapunk.

14