175202. lajstromszámú szabadalom • Eljárás diszulfidkötéses gyűrűt tartalmazó peptidek előállítására
175202 Gyürüzárás /oxitocin előállítása/: módon előállított nyers peptid 50 ml oxiviz és 1 ml jégecet eledében részlegesen 200 mg, a fenti génmentes desztillált oldunk, majd a folyadékfázis pH-ját tömén:; ammóniumhidroxidoldattal 7»5--üe állítjuk, Az elegyet zart edényben, nitrogén-bevezetés közben 24 órán át keverjük. 24 óra elteltével az edényből távozó nitrogénáramban etilmer kaptán már nem mutatható ki. A távozó nitrogéngáz etilmerkaptán-tartalmát úgy mutatjuk ki, hogy a gázáramot Ellman-reagenst tartalmazó oldaton /arch. Biochem. Biophys. 82,70-77 /I959/7 bocsátjuk át. azután a reakcióelegyet jégecettel pH = 5,2 értékre savanyítjuk, majd liofilizáljuk. A nyers oxitocin tisztítása: A fenti lépésben kapott szilárd maradékot 0,5 Q vizes ecetsav-oldatban oldjuk, és az oldatot finomszemcsés Gephadex G-25 géllel töltött oszlopon bocsátjuk át. A gyantaoszlopot 0,5 n vizes ecetsav-oldattal eluáljuk. Az oxitocint tartalmazó frakciókat egyesitjük és liofilizáljuk. 52l- mg fehér, szilárd anyagot kapunk. A kapott szilárd anyagot ismét 0,5 n vizes ecetsav-oldatban oldjuk, az oldatot finonszemcsés Sephadex G-25 géllel töltött oszlopon bocsátjuk át, maja az oszlopot 0,5 n vizes ecetsav-oldattal eluáljuk. Az oxitocint tartalmazó frakciókat egyesitjük és liofilizáljuk. Pelyhes, fehér, szilárd anyagot kapunk, amelynek aminosav-elemzési adatai a következők: GLY: 1,0; Li.TJ: 0,93; PAO : 0,97í AGP: 0,89; ŒLU: 0,84; ILI: 0,74; PYR: 0,72. A cisztein-tartalmat ezzel a mérési módszerrel nem határozhatjuk meg, mert az elemzési körülmények között a cisztein lebomlik. A termék biológiai aktivitása 505,4 egység/mg. A fent ismertetett eljárás a szomatosztatin szintézisére is alkalmazható. Ebben az esetben gyantaként például klórmetilezett polisztirol-gyantát használhatunk fel. Az első lépésben B0C->3-/5,4-dimetil-benzil/-L-cisztein felhasználásával a 14-es helyzetű cisztein-részt kapcsoljuk a gyantához, majd a 7* táblázatban felsorolt reagensek felhasználásával kiépítjük a peptiu-láncot. A peptid-lánc 5-as helyzetében n-alkiltio-védőcsoportot hordozó cisztein-r észt épitünk be. ii peptidlánc kiépítése után kapott termék a /CHj/pCgHj-CH BZ BZ BZ v y a-GHgi-OC YB -SER-fcíR- 1ÏIE-ÎHR-Î.YB -ÏRP-PIIE-PHZ-AGÎÏ-LYS SE CYS GLY-A'LA-II képletnek felel meg, ahol a, BZ, V és E jelentése azonos a korábbiakban közhitekkel. Ebből a termékből savas hasítás révén a ■- a I H-A IA -GLY-CYS -LYS -AS N-PHS-PHE-PRP-LYS -ŒHB-PHE-ŒHB-S ER-CYS -OH képletü peptidet állitjuk elő? amelyet a korábban ismertetett módon gyűrűz ár ás na k vetünk ala. A kapott gyűrűs peptid a H—ALA —GLY -CYS —LYS —A G B -PHE -PILl -TRP-LYS —YHR—HL.'—ifHR-G ER -&YS -GEE képletnek felel meg. A találmány szerinti eljárást az emberi kalcitonin szintézisére is igen előnyösen alkalmazhatjuk. Az emberi kalcitonin szintézise során HEiA-gyantát használunk fel, amelyhez először 32-ea helyzetű prolin-részt kapcsoljuk, majd a korábban 15
