175202. lajstromszámú szabadalom • Eljárás diszulfidkötéses gyűrűt tartalmazó peptidek előállítására
175202 adunk, éa a szuszoenziót 30 percig keverjük. ,.zután a gyantát kiszűrjük, ás 2-2 percig kloroformual /2-szer 20 ni/, metanollal /2-szer 20 ml/, végül meüilénkloridctal /3-szor 20 ml/ mossuk. A mosóíolyadék ninhidrinnel nem aa reakciót. & BOC-vadócsoport lehasitása: 1 fonti lépésben kaDOtt gyantát 5 percig 12 ml trifluorecetsav és 12 ni netilénklor id elegyével kezeljük. A gyantát kiszűrjük, aajd ismét 12 ml trifluorecetsav és 12 ml metilénklorid elegyéhez adjuk. 30 perces kezelési idő után a gyantát kiszűrjük, és egymás után a következő oldószerekkel mossuk: 2-szer 20 ml metilénklorid /kezelési idő: 2-2 perc/, 2-szer 20 ml metanol /kezelési idő: 2-2 perc/, 2-szer 20 ml kloroform /kezelési idő: 2-2 perc/, 2-szer 20 ml 1:9 arányú tr iet il-amin : kloroform elegy /kezelési idő: 5, illetve 10 perc/, 2-szer 20 ml kloroform /kezelési idő: 2-2 perc/ és 2-szer 20 ni metilénklorid /kezelési idő: 2-2 perc/. Az L-glicil-csoportokat hordozó BHA-gyanta ar.iin-f5ktorát, illetve glicin-faktorát Dorman módszerével /Tetrahedron Letters 2319-21 /1969// határozzuk meg. A gyanta amin-, illetve glicin-f ktora 0,384 uilliekvivalens/g. 8. ciklus: Kapcsolás: A 9* ciklusban kapott L-glicil-BKA-gyantához 20 ml netilénkloridőt és 2,95 6 /0,0038 mól/ BCC-L-leucin. ILO-t adunk, és a szuszpenziót 10 percig keverjük, azután a szuszul metilánkloridős diciklohemil-karbodiimid-oldaoenziouoz tot /űiciklohemil-karbodiimid-koncentráció: 1 milliekvivalens/ ml/ adunk, és a rendszert további 2 órán át keverjük. A gyantát kis zűrijük, és egymás után a következő oldószerekkel mossuk: 2-sser 20 ml metilénklorid, 2-szer 20 ml metanol és 2-szer 20 mi metilénklorid. A mosási idő minden esetben 2 perc; minden egyes mosási lépés után szűréssel eltávolítjuk a mosófolyadékot. A mosóíolyadék ninhidiinnel nem ad reakciót. A védőcsoport lehasitása: A BOC-vadócsoportot a 9« ciklusnál ismertetett módon hasítjuk le. 7* ciklus: A 8. ciklusnál ismertetett módon járunk el, azzal a különbséggel, hogy a kapcsolási lenesben reagensként 0,82 g /0,C038 mól/ BOC-L-prolint használunk fel. A védőcsoportot a 9. ciklusban ismertetett módon hasítjuk le. 6. ciklus: A kapcsolási reakciót és a védőcsoport lehasitúsát a 8. ciklusnál leirt módon hajtjuk végre, azzal a különbség hogy a kapcsolási lépésben reagensként 1,07 g /0,0038 m BOC-S-etil-tio-ii-ciszteint használunk fel. Az acetilezést a 9* ciklusnál leirt módon végezzük. 5« ciklus: Kapcsolás: A 6. ciklusban kapott gyantát 2-szer 20 ml dimetilformamiddal mossuk, ma^d a gyantához 2,01 g /0,0057 mól/ BOC-L-aszpaxagin-p-nitrofenileszter 25 nil dimetilformamiddal készített oldatát adjuk, és a szuszpenziót 24 órán át keverjük. A gyantát kiszűrjük, majd 2-2 percig 20-20 ml dimetilformamiddal, metilénkloriddal. metanollal és metilénkloriddal mossuk. Minden egyes mosási lépés után szűréssel eltávolitjuk a mosófolyadékot. A mosóíolyadék ninhidrinnel nem ad reakciót. A védőcsoport lehasitása: A BOC-védőcsoportot a 8. ciklusnál leirt módon hasítjuk le. 13
