175202. lajstromszámú szabadalom • Eljárás diszulfidkötéses gyűrűt tartalmazó peptidek előállítására

175202

rauolekuláris diszulfid-hid kialakulásán kivül semmiféle más változást neia szenved.

Az intramolekuláris átrendeződés lezajlása után kapott oldatot önmagában ismert módon tisztíthatjuk, igy például az oldatot gélszürésnek és ioncserés kromatográfiának vethetjük alá.

Á tisztitt végterméket liofilizálással különíthetjük el az oldatból. Vizsgálataink szerint az igy kapott peptidek kémiailag és biológiailag egyaránt egyenértékűek a természetes orr ás okból elkülönített, megfelelő gyűrűs peptidekkel .

A találmány szerinti eljárás különösen előnyösen alkalmazható lazao-kalcitonin előállítására. A lazac-kalcitonin előállítása során ciklizálásra kerülő centidet a 2. táblázatban lelsorolt reagensekből alakítjuk ki. A peptid-szintézis első lépésében a BOC-L-prolint a gyantához kapcsoljuk, majd a 2. táblázatban felsorolt reagensek felhősználásával felépítjük a peptidet. A kapott peptid az n-alkiltio-védőcsoçortot~ hordoz6 ciiztein-rászt a 7-ss, a BZ-védőcsoportot hordozo cisztein-részt pedig az 1-es helyzetben tartalmazza. A peptid-lánc felépítése után a gyantát hidrogénfluoriddal kezeljük, és igy eg"részt elküld Atjük a peptidet a gyantától, másrészt pedig - a 7-es helyzetű cisztein-részhez kapcsolódó n-alkiltio-védőcsoport kivételével - az összes v édőcs opor tot lehr.;-: it juk. A savas kezelés során kapott oldatot vízzel hígítjuk, majd a vizes elegyet arnrnóniunhidroxid-oldattal pH = 7,5 értékig lúgos itjuk. Bzután az oldatot nitroçénbevezetés közben keverjük, majd amikor a rendszerből távozo nítrogéngáz már nem tartalmaz merkaptánt, az oldatot tisztítjuk és a terméket elkülönítjük. Az igy kapottt tisztított termék kémiailag, és biológiailag egyaránt egyenértékűnek bizonyult a természetes forrásból elkülönített lazac-kalcitoninnal.

A 2. táblázatban felsorolt reagensekből felépített peptid szerkezete

F3

XI £

a s

avas

hasítás

előtt a

BZ

BZ

BZ

BZ

T

T ■

BZ

1

1

»

1

1

i

I

■2HR

-GLY-C- YR-GBY-THR-A £ IT-RIÍR-AI

íG-BRO-TYR-TíiR'

V V BZ

I J 1-Lüü-LTS - J12 -LYU-GLU - GL1ÏBZ

1

V

I

GLlí- 3-n-gkil

£ RR-LZU-LYS -GLY-LRU-VA L-CYJ -ÏÏIIRBZ BZ BZ

-íj ER-LYÜ—A31T JsüR -CYB -H

képletnek felel meg. ahol S a gyanta-mátrixot jelenti, a további csoportok jelentése pedig a fenti. Az igy kapott peptid a vízmentes savval végzett hasítás után a lazac-kalcitonin előállításában kiindulási an^agkéjl^^elhasználható,

H-CYS -G ER-ASR-LIHJ-S YR-THR-ÍyB -VAL-LEÜ-GbY-LYS -LEÜ-SER-GLN- Czlí ü -LEU—HIS -LYS —LEU- GLN-TIIR-ŒYE-PR 0-A A G—TER-A S N-THR-GLY-G YR-GLY-TIÍR-PRC—

képletü vegyületté alakul, gyürüzárási eljárással a

vegyületből a találmány szerinti

H-SŸS —S SR-ASIT—LEU -S EB—THB-èl£S -VAL-LEU-GLY-LYS -LEU-S ER-GLÏÏ—GLU—

-LEU-HK-LYS-LEU-GLN-TOR-YYR-PRO-ARG-TïIR-ASN-THR-GLY-SER-GLY-THB-PRO-HH

11