175179. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pikolinsav-származékok előállítására
9 175179 10 acetonnal letöröltük és az állatokat nyakuk kitekerésével elpusztítottuk. Bőrüket lenyúztuk és a kezelt területekről 8 mm átmérőjű kimetszéseket vettünk. A bőrmetszeteket 2 ízben 2 ml kloroformban politron homogenizátorral homogenizáltuk. A homogenizált anyagot közvetlenül inkubációs lombikba szűrtük és az oldószert nitrogéngázban eltávolítottak. A lombikba enzimet, szubsztrátot és puffert adtunk és a vizsgálatot a Corynebacterium acnes előzetes vizsgálatánál fent ismertetett módon hajtottuk végre. Az eredményeket a következő táblázatban ismertetjük. A kapott értékeket 5-5 patkányból álló csoportokon határoztuk meg és mindegyik patkányról 2-2 bőrmintát vettünk. Az így kapott 10-10 eredményt szokásos statisztikai módszerrel átlagoltuk. A hordozóanyag 10 fú dimetilszulfoxid volt. Az 5-trifenilmetil-pikolinsav és a hexaklorofén hatásának összehasonlítása patkány hátán helyi alkalmazással Kezelés Adag ug Kezelés Szabad zsir száma sav ueq/1- Gátlás % Hordozó 1 501 0 2,5% 5-trifenilmetil-pikolinsav 250 1 292 42 Hordozó — 1 425 0 2,5 hexaklorofén 250 1 405 5 Hordozó __ 10 661 0 2,5% 5-trifenilmetil-pikolinsav 250 10 336 49 Hordozó — 10 452 0 2,5% hexaklorofén 250 10 395 13 Hörcsög lágyékán végzett akut vizsgálat. 5 és 10 ni vizsgálati vegyülettel kezeltük érzéstelenített patkányok szőrtelenített lágyékát. Ha ismételt kezelést végeztünk, akkor az újabb kezelés előtt a lágyékot acetonnal lemostuk. A kontroll állatok csak hordozóanyagot kaptak. Az utolsó kezelés után 3 órával az összes állatot leöltük. A lágyékot hasonló módon extraháltuk, mint a patkányok bőrét, azonban ahhoz, hogy az enzim a triglicerideket felhasználhassa, 0,5 ml, 2,5 %-os arabmézgában homogenizálva ismét szuszpendáltuk. Enzimet és puffért adtunk az extraktumhoz, majd a vizsgálatot a patkány bőrén végzett vizsgálattal azonos módon végeztük. Az eredményeket a következő táblázatban ismertetjük. Az eredményeket a következő táblázatban ismertetjük. Az 5-trifenil-pikolinsav helyi hatása hörcsög lágyékán A) Gátlás altatott hörcsögökne'l Kezelés Adag Kezelés Szabad zsir Gátlás /augjszáma sav/ueq/1 % Hordozó o,l % 5-trifenümetü-1 420 0 pikolinsav 0,01 %5-trifenilmetil-10 1 110 74 pikolinsav 1 1 390 7 Hordozó 0,075% 5-trifemlmetil- 1 286 70 pikolinsav 0,05 % 5-trifenilmetil 7,5 1 74 74 pikolinsav 0,025%5-trifenimetil-5 1 110 62 pikolinsav 2,5 1 117 59 B) Az 5-trifenilmetil-pikolinsav ismételt és egyszeri alkalmazásának összehasonlítása éber hörcsögökön Kezelés Adag Kezelés Szabad zsir- Gátlás /ug száma sav/ueq/1 % Hordozó 1 608 0 0,1 % 5-trifenilmetil pikolinsav 10 1 354 42 Hordozó — 20 335 0 0,1% 5-trifenilmetil pikolinsav 10 20 196 41 Az A) vizsgálatnál hordozóként dimetilszulfoxidot, a B) vizsgálatnál acetont használtunk. Az ismertetett in vivo vizsgálatokhoz 200-250 g-os Charles River CD him patkányokat és 200-250 g-os aranyhörcsögöket használtunk. C) A mikrobiológiai hatékonyság meghatározása in vitro. Az 5-trifenilmetil-pikolinsav, hexaklorofén és tetraciklin in vitro hatékonyságát mint minimális gátlási koncentrációt (MGK) pg/ml-ben határoztuk meg, amely 5 Coiynebacterium acnes törzs, tioglikolát táptalajon 37 °C-on 10 % széndioxid és 90 % nitrogén jelenlétében végzett tenyészetét 24 és 48 óra után gátolta. A beoltást 4 ml tioglikolát táptalajon 105 sejttel végeztük. A többi baktérium és élesztő tenyészetet aerób körülmények között 37°C-on tenyésztettük. A baktérium tenyészeteket Müller-Hinton táptalajon és az élesztő tenyészeteket Sabourand-féle dextróz táptalajon vizsgáltuk. Az inokulált anyag azonos volt a Coynaebacterium acnes esetén használttal. A megadott adatok 48 órás értékek. Az eredményeket a következő táblázatban szemléltetjük. Az 5-trifenilmetil-pikolinsav, hexaklorofén és tetraciklin in vitro antibakteriális hatása Corynebacterium acnes és más baktériumok és élesztők ellen (MGK, Mg/ml). 5-trifenil- hexakloro- tetraciklin pikolinsav fém Corynebacterium acnes 6921 3,0 0,005 0,75 6922 3,0 0,005 3,0 11827 3,0 0,005 0,75 6912 3,0 0,005 3.0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
