175177. lajstromszámú szabadalom • Eljárás polién-tipusú 67-121 antibiotikum-komplex és komponensei előállítására
175177 Az összehasonlításra használt 67-121 antibiotikum kandicinként kifejezett hatékonysága a Code of Federal Regulation, Section 148v Title 14 szerinti kandicinpróbában meghatározva 4000 /ug/mg. Az antibiotikumtermék elkülönítése és tisztítása A termelés csúcsértékének elérése után a fermentléből a polién antlbiotlkumtérmékét ismert módon elkülönítjük. Például a következő müveletsorozatot alkalmazhatjukí a/ a fermentlé pH-ját 2,5-4,0-re állítjuk be; b/ a megsavanyitott fermentléből a micéliumot szűréssel elválasztjuk; c/ a micéliumot egyszer vagy többször olyan alkalmas szer- ' vés oldószerrel extraháljuk, amely vízzel nem vagy csak nagyon kevéssé elegyedik; d/ a szerves kivonatokat egyesitjük, és bepároljuk; e/ a kapott bepárlási maradékot nem-poláris szerves oldószerrel, például telitett vagy telítetlen szénhidrogénnel vagy alkiléterrel, előnyösen dietiléterrel digeráljuk; f/ a keletkezett szuszpenziót szűréssel elválasztva nyers 67-121 antibiotikum-komplexet kapunk. ügy is eljárhatunk, hogy a polién antibiotikumot tartalmazó fermentlét 2,5-4,0 pH-ra megsavanyitjuk. a megsavanyitott fermentlét vízzel nem vagy csak nagyon kévéssé elegyedő szerves oldószerrel közvetlenül extraháljuk, majd az egyesitett kivonatokat a fenti á/-f/ műveletek szerint kezeljük. A gyakorlatban azt találtuk, hogy a fent közölt módszerekkel kapott nyers 67-121 antibiotikum-komplex a fent l’eirt hengeres észe próbában 250 / ug/mg hatékonyságú. A nyers polién antibiotikumot Ismert módon, például frek- - cionált kristályosítással, sorozatos oldás-kiosapással, ellenáramú extrahálással stb. tisztíthatjuk. így például a 250 /Ug/mg hatékonyságú nyers 67-121 antibiotikum-komplexet úgy tisztítjuk, hogy kloroform, metanol és viz 2*2:1 térfogataranyu keverékének alsó fázisában oldjuk, a keletkezett oldatból az oldhatatlan anyagot szűréssel eltávolítjuk, a szüredékhez literenként 10 liter dietilétert adunk, és a keletkezett sárga csapadékot szűrőn elválasztjuk. A csapadékot ezután az előbb említett kloroform, metanol és viz keverék faegfelelő mennyiségű felső fázisában oldjuk, az oldatot megszűrjük, és a szüredéket vákuumban állni hagyjuk, mire kellő mennyiségű oldószer elpárolgása következtében a tisztított antibiotikum-komplex kicsapódik. A tisztított csapadékként kapott antibiotikum-komplexet szűréssel elválasztjuk, dietiléterrel mossuk, és vákuumban szárítjuk. Az ilymódon tisztított 67-121 antibiotikum-komplex 1000 /ug/mg /vagy kandicidinként kifejezve 4000 /ug/mg/ hatékonyságú. Az antibiotikum-komponensek szétválasztása A 67-121 antibiotikum-komplexet komponenseire kromatográfiai módszerekkel, például oszlopkrómatografálássál választhatjuk szét. Oszlopkromatografálás esetén adszorbénaként különösen kovasavgél és eluálószerként 2:2:1 térfogatarányu kloroform-metanol-v i z-kever ék alsó fázisa alkalmas. 13
