175158. lajstromszámú szabadalom • Eljárás naftacénszármazékok előállítására
47 175158 48 glicerin 7,6 kg, kalciumkarbonát 0,800 kg, csapvízzel 360 literre kiegészítve. A folyékony táptalaj pH-ja ekkor 6,45. A folyékony táptalajon 40 percig 122°-os vízgőzt átbuborékoltatva sterilizáljuk. Lehűlés után térfogata a sterilizálás folyamán kondenzált vízgőz miatt 400 liter, és pH-ja 6,25. Ekkor hozzáadunk 300 g szulfanilamidot tartalmazó 10 liter steril vizes oldatot. A folyékony táptalaj pH-ja 6,80-ra változik. Az előzőekben említett 75 literes fermentálóban levő 40 liter oltó-tenyészettel beoltjuk, és 27°-on tartva, percenként 205 fordulatú turbinával keverve és óránként 20 m3 steril levegővel levegőztetve, 24 óra hosszat inkubáljuk, majd hozzáadunk 44 g szulfanilamidot tartalmazó 3 liter steril vizes oldatot, és a fermentálást tovább folytatjuk. 140 órai tenyésztés után a fermentlé pH-ja 6,75 és térfogata 350 liter, 32 999 RP tartalma 35 g/liter. b) Extrahálás Az előzőek szerint kapott 350 liter fermen tiéhez hozzáadunk 350 liter metanolt, és 6 n nátriumkarbonát-oldattal pH-ját 7,5-re állítjuk be, majd 1 óra hosszat keverjük. Miután 25 kg szűrést elősegítő adalékot adtunk hozzá, a szuszpenziót szűrőprésen elválasztjuk. A szüredéket összegyűjtjük. A szűrőlepényt 100 liter 50% vizet tartalmazó metanollal mossuk. A szüredéket és a mosófolyadékot egyesítve, csökkentett nyomáson 250 literre bepároljuk. A bepárlási maradékot 220 ml 6 n nátriumkarbonát-oldattal meglúgosítjuk, és az antibiotikumot 150 liter 80:20 térfogatarányú metilénklorid-butanol eleggyel kétszer extraháljuk. A 238 liter szerves kivonatot egyesítve, csökkentett nyomáson 30 literre bepároljuk. A bepárlási maradékhoz 100 ml 11 n sósavval telített n-butanolt adunk, majd 3 literre bepároljuk. Ezt a bepárolt oldatot lassan 21 liter hexánba öntjük. A kapott csapadékot szűrőn szívatással elválasztjuk, mossuk és szárítjuk. 137 g nyers 32 999 RP-hidrokloridot kapunk. c) Tisztítás 1. Az előzőek szerint kapott 112 g nyers 32 999 RP-hidrokloridot 1 liter 50°-os vízben oldjuk. A 2,9 pH-jú oldatot üvegszűrőn átszűrjük, és a szüredékben levő színes szennyezéseket kétszer 500-500 ml, majd egyszer 1 liter kloroformmal extraháljuk. A vizes fázishoz 75 g nátriumkloridot adva, az antibiotikumot 0,5 liter n-butanollal háromszor extraháljuk. A vizes fázis pH-ját tömény nátriumkarbonát-oldattal 9,5-re állítjuk be, és a maradék antibiotikumot 0,5 liter n-butanollal extraháljuk. Az antibiotikumot tartalmazó butanolos kivonatokat egyesítjük, és csökkentett nyomáson 1 literre bepároljuk. A bepárlási maradékhoz 1 liter kloroformot adunk, és a kapott oldatot 9,5 pH-ra lúgosított 500 ml vízzel kétszer mossuk. A mosófolyadékot 9,5 pH-nál 500 ml 80 : 20 térfogatarányú kloroform-n-butanol eleggyel kétszer extraháljuk. A szerves kivonatokat egyesítjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A bepárlás alatt hozzáadunk 300 ml 94 : 5 :1 térfogatarányú n-butanol-víz-11 n sósav elegyet, és a bepárlást addig folytatjuk, amíg 150 ml maradékot nem kapunk. Ezt a maradékot lassan 2 liter hexánba öntjük. A kivált csapadékot szűrőn szívatással elválasztva, mosva és szárítva 32 999 RP-hidrokloridot tartalmazó 30 g terméket kapunk. 2. 13 g így kapott terméket 26 ml 20:80 térfogatarányú víz-dioxán elegyben 35°-on feloldunk, lassan hozzáadunk 624 ml dioxánt, és 3 óra hosszat keverjük. A kivált kristályokat szűrőn szívatással elválasztva, mosva és szárítva, 32 999 RP-hidrokloridot tartalmazó 2 g kristályos terméket kapunk. 3. A fentiek szerint kapott 4,47 g kristályos terméket 40 ml vízben oldjuk, és az oldatot megszűrjük. A szüredékben levő 32 999 RP antibiotikum keverés és 405 ml aceton hozzáadásával kikristályosodik. A kivált kristályokat szűrőn szívatással elválasztjuk, mossuk és szárítjuk, mire 2,47 g, kristályos 32 999 RP-hidrokloridot tartalmazó terméket kapunk. 4. A fentiek szerint kapott 2,84 g terméket 28,4 ml, 50:50 térfogatarányú metanol-aceton elegyben feloldjuk, majd az oldathoz hozzáadunk 16,9 ml 84:16 térfogatarányú aceton-víz elegyet. 30°-ra melegítve, majd lehűtve a 32 999 RP-hidroklorid kikristályosodik. A kivált kristályokat szűrőn szívatással elválasztva, mosva és szárítva, 2,33 g, félig tiszta, kristályos 32 999 RP-hidrokloridot kapunk. 5. A fentiek szerint kapott, félig tiszta, 185 g hidrokloridot 400 ml 6,6 pH-jú vízben feloldjuk. A színes szennyező anyagokat úgy távolítjuk el, hogy ezt az oldatot 400-400 ml 20 : 80 térfogatarányú n-butanol-kloroform eleggyel tízszer extraháljuk. A vizes fázist bepároljuk, és a bepárlás során az oldathoz n-butanolt adunk. így 75 ml butanolos fázist kapunk, ezt lassan 1,5 liter hexánban öntjük. A kapott csapadékot szűrőn szívatással elválasztva, mosva és szárítva, 1,4 g tiszta 32 999 RP-hidrokloridot kapunk. Ez a termék azonos a 8. példában kapott vegyülettel. 23. példa A - Fermentálás 170 literes fermentálóberendezésbe a következő anyagokat adjuk: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 24
