175151. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenilglicint tartalmazó, gasztrin hatású peptidek előállítására
15 175151 16 1. lépés N-(Benzil-cxi-karbonil)-L-leucil-L-aszparagil- 5-0-(terc-butil-észter)-D-fenil-glicin-amid 5,0 g (14,0 mmól) H-Asp^Buí-D-Phg—NH2* • HCl-ot (1. példa, 4. lépés) és 5,13 g (14,2 mmól) Z—Leu—OSu-t feloldunk 60 ml DMF-ban, és az 10 oldathoz hozzáadunk 1,96 ml (14,0 mmól) trietilamint. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, és a maradékot vízzel eldörzsölve izoláljuk. A 7,32 g nyersterméket etanolból derítéssel átkristályosítjuk. így 6,05 g (77,7%) Z-Leu-Asp(OtBu)- 15 — D—Phg—NH2-ot kapunk, olvadáspont 192--194 °C, Rf =0,75. Kismennyiséget etanolból átkristályosítunk, ennek olvadáspontja: 195—196 °C. [a]D = —69,5° (c = 1,0, dimetilformamidban). Elemzési eredmények a C30H40O7N4 összeg- 20 képlet (molekulasúly: 568,67) alapján: számított: C =63,36%, H = 7,09%, N = 9,8%, talált: C =63,54%, H =7,38%, 25 N = 10,07%. 2. lépés L-Leucil-L-aszparagil-D-fenil-glicin-amid 30 5,20 g (9,15 mmól) Z—Leu-Asp(OtBu)—D-Phg—NH2-ot (5. példa, 1. lépés) 1 órán keresztül 50 ml n hidrogénbromidos ecetsavval reagáltatunk. A reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a hidro- 35 bromidot vízmentes éterrel izoláljuk. Az 5,33 g hidrobromidot 50 ml kloroformban szuszpendáljuk. A szuszpenzió pH-ját trietilaminnal 7-re állítjuk, majd a gélszerű terméket szűrjük, és etanollal mossuk. így 2,45 g (70,5%) H—Leu—Asp—D—Phg- 40 -NH2-ot kapunk, olvadáspont: 218-220 °C, R? =0,25. 5. példa 3. lépés N-(terc-Butil-oxi-karbonil)-L-triptofil-L-metionil-L-aszparagil-D-fenil-glicin-amid 50 2,25 g (5,93 mmól) H-Leu-Asp-D-Phg-NH2- -ot (5. példa, 2. lépés) 50 ml DMF és 10 ml HMFA elegyében feloldunk, majd az oldathoz 0,84 ml (5,93 mmól) trietilamint és 2,65 g (6,6 mmól) 55 BOC-Trp-OSu-t adunk. A reakcióelegy 4 órán át tartó keverés után kitisztul, másnapig állni hagyjuk. Ekkor a DMF-ot vákuumban lepároljuk, és a maradék FlMFA-os elegyet vízzel felhígítjuk, majd a csapadékot hidegen állni hagyjuk, végül leszűrjük. 60 A 4,31 g nyersterméket etilacetáttal kétszer felforraljuk, és a szuszpenziót forrón szűrjük. így 2,87 g (72,8%) BOC—Trp—Leu—Asp—D—Phg—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 195—200 °C, R|=0,55, amelyet további tisztítás nélkül használunk fel. 65 L-Triptofil-L-leucil-L-aszparagil-D-fenil-glicin-amid 4. lépés 2,8 g (4,2 mmól) BOC—Trp—Leu—Asp—D—Phg—NH2-ot (5. példa, 3. lépés) 0,59 ml (8,4 mmól) merkapto-etanol jelenlétében 30 ml sósavas dioxánnal kezelünk. 15 perc múlva a reakcióelegyet vízmentes éterrel felhígítjuk. A 2,60 g súlyú hidrobromidot 150 ml vízben szuszpendáljuk, és a szuszpenzió pH-ját trietilaminnal 7-re állítjuk, majd a csapadékot kiszűrjük, és vizzel mossuk. így 2,22 g (93,7%) H-Trp-Leu-Asp-D-Phg-NH2-ot kapunk, R/ = 0,35, olvadáspont: 246-248 °C (bomlik). 5. lépés 2-(terc-Butil-oxi-karbonil-amino-oxi)-acetil-L-triptofil-L-leucil-L-aszparagil-D-fenil-glicin-amid 1,10 g (1,95 mmól) H—Trp—Leu—Asp—D—Phg—NH2-ot (5. példa, 4. lépés) 0,28 g (2,0 mmól) trietilamin jelenlétében 10 ml DMF-ban feloldunk, majd az oldathoz hozzáadunk 0,92 g (2,10 mmól) BOC—OGly—OPCP-t (1. példa, 9. lépés). Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot vízmentes éterrel izoláljuk. Az 1,46 g súlyú nyersterméket tízszeres mennyiségű etil-acetáttal forrón szűrjük. Az így kapott 1,31 g súlyú anyagot 6 ml 10. futtatóelegyben oldva 80 g szilikagélből készített oszlopon kromatografáljuk, 8 ml/óra sebességgel a 10. futtatóelegyben eluálva. A tiszta frakciók összegyűjtésével kapott 0,52 g súlyú terméket 80%-os etanolból átkristályosítjuk. így 0,45 g (31,3%) BOC—OGly—Trp—Leu—Asp—D—Phg—NH2 - -ot kapunk, olvadáspont: 206-208° (6), R® =0,75, [a]D = —51,7° (c = 0,5, dimetilformamidban). Elemzési eredmények a C34H4 70ioN7 összegképlet (molekulasúly: 737,82) alapján: számított: C =58,60%, H =6,42%, N = 13,29%, talált: C =58,70%, H =6,65%, N = 13,51%. 6. példa 1. lépés N-(benzil-oxi-karbonil)-L-leucil-L-aszparagil-íKterc-butil-észter)-L-fenil-glicin-aniid 4,0 g (11,2 mmól) H-Asp^Buí-L—Phg—NH2* • HCl-ból kiindulva (2. példa, 4. lépés) a D-diasztereomerhez hasonlóan végezzük a kapcsolást (5. példa, 1. lépés). Az 5,42 g nyersterméket etanolban derítjük, majd az oldatból kicsapjuk a terméket, így 3,0 g (47%) Z-Leu-Asp(0* Bu)-L-Phg-NH2 - -ot kapunk, olvadáspont 193-194 °C (bomlik), 8
