175151. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenilglicint tartalmazó, gasztrin hatású peptidek előállítására
11 175151 12 2. példa 1. lépés N<Benzil-oxi-karbonil)-L-fenil-glicin-amid 27,6 g (97 mmól) Z-L-Phg-OH-t 300 ml vízmentes tetrahidrofuránban feloldunk, az oldathoz 13,55 ml (97 mmól) trietilamint, majd -10°C-on 12,1 ml (97 mmól) pivaloil-kloridot adunk. A vegyes anhidrid szuszpenzióját 10 percig —10°C-on keverjük, majd hűtés megszüntetése után 1 órán keresztül ammónia-gázt vezetünk a szuszpenzióba. Másnap a reakcióelegyet bepároljuk, és a D-enantiomerhez hasonlóan dolgozzuk fel. így 18,90 g (68,7%) Z-L—Phg—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 172-173 °C, Rjl = 0,75, [a]D =+80,7° (c = 1,0, dimetilformamidban). 2. lépés L-Fenil-ghcin-amid-hidrobromid Az 1. példa 2. lépésében ismertetett módon járunk el és kiindulási anyagként Z-L-Phg-NH2- -ot alkalmazunk. Kitermelés 88,8%, R® = 0,25, [a]D = +76,5°, (c = 1,0, dimetilformamidban). 3. lépés N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-aszparagil-/3--(terc-butil-észter)-L-fenil-glicin-amid 8,65 g (37,5 mmól) H—L—Phg—NH2-ot (2. példa, 2. lépés), 21,6 g (37,5 mmól) Z-Asp(0‘Bu)OPCP-t 160 ml DFM-ban reagáltatunk 5,15 ml (37,5 mmól) trietilamin jelenlétében. A szuszpenzióhoz 30 perc keverés után újabb 5,15 ml (37,5- -mmól) trietilamint öntünk. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, és az olajszerű maradékot éterrel izoláljuk. A csapadékot vízzel mossuk, a 13,9 g nyersterméket etanol-vízből kristályosítjuk. így 10,6 g (65,8%) kromatográfiásan egységes Z—Asp(OtBu)—L—Phg-NH2-ot kapunk, olvadáspont: 207—208 °C, kismennyiségű mintát etanolból átkristályosítunk, ennek olvadáspontja 209 °C, Rf =0,75, [a]D = +21,6° (c = 1,57, dimetilformamidban). Elemzési eredmények a C24H29OéN3 összegképlet (molekulasúly: 455,50) alapján: számított: C =63,28%, H =6,42%, N = 9,23%, talált: C =63,50%, H =6,38%, N = 9,23%. A nyers terméket éteres anyalúgjából kivált kevés csapadékot kiszűrjük, vízzel mossuk, majd etanoiból át kristályosítjuk. így 0,47 g (2,9%) Z-AspíO'B^-D—Phg—NH2 -ot kapunk, olvadáspont: 1 88-189 °C, R/=0,75, [a]D = -59,0° (c = 1,0, dimetilformamidban). A-Aszparagil-íHterc-butil-észter)-L-fenil--glicin-amid-hidroklorid 9,6 g (21 mmól) Z-Asp(0*Bu)-L-Phg-NH2- -ról (2. példa, 3. lépés) a D-diasztereomerhez hasonlóan távolítjuk el a védőcsoportot (1. példa, 4. lépés. így 8,03 g, fölös sósavat tartalmazó, kromatográfiásan egységes H-Asp(0* Bu)-L Phg-NH2 - -ot kapunk, Rf = 0,35. 5. lépés N-(terc-Butil-oxi-karbonil)-L-metionil-L-aszparagil-/3-(terc-butil-észter)-L-fenil-glicin-amid 3,95 g (10,5 mmól) H—Asp(0*Bu)—L—Phg—NH2 • HCl-ot (2. példa, 4. lépés) és 5,22 g (12,6 mmól) BOC—Met—OPFP-t feloldunk 50 ml DMF-ban, és az oldathoz 2,94 ml (21 mmól) trietilamint adunk. 1 óra múlva a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot n-hexánnal izoláljuk, majd vízzel mossuk. Az 5,38 g nyersterméket 25 ml metanolban forrón oldjuk és 25 ml vízzel kicsapjuk. így 4,70 g (81%) BOC-Met-AspíC^Bu)-L-Phg-NH2 -ot kapunk. Kismennyiségű mintát metanol-éter elegyből végzett átcsapással tisztítunk, olvadáspont 162-163 °C, R^=0,75, [a]D =-5,5° (c = 1,0, dimetilformamidban). Elemzési eredmények a C2íH4o07N4S összegképlet (molekulasúly: 552,69) alapján: számított: C =56,51%, H =7,30%, N =10,14%, S =5,7%, talált: C =56,70%, H =7,34%, N = 10,35%, S =5,68%. 6. lépés L-Metionil-L-aszparagil-L-fenil-glicin-amid-hidroklorid 4,2 g (7,6 mmól) BOC-Met-Asp(OtBu)-L-Phg-NH2-ot (2. példa, 5. lépés) a D-diasztereomerhez hasonlóan kezelünk. így 3,2 g (97%) H—Met—Asp—L—Phg—NH2 • HCl-ot kapunk, olvadáspont: 198—200 C, Rf = 0,25 (vö. a D-diasztereomerével). 7. lépés N-(terc-Butil-oxi-karbonil)-L-triptofil-L--metionil-L-aszparagU-L-fenil-glicin-amid 3,45 g (8 mmól) H-Met-Asop-L-Phg—NH2 - HCl-ból (2. példa, 6. lépés) kiindulva a D-diasztereomerhez hasonlóan végezzük a kapcsolást (1. példa, 7. lépés). így 4,77 g (97,9%) BOC-Tpr-Met—Asp—L—Phg—NH2-ot kapunk, olvadáspont 191-193 °C (bomlik). Kismennyiségű mintát 80%-os etanolból átkristályosítunk, ennek olvadáspontja 200 °C (bomlik), Rfs=0,35, [a]D=0° (c = l,0, dimetilformamidban). 4. lépés 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
