175151. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenilglicint tartalmazó, gasztrin hatású peptidek előállítására
9 175151 10 —Met—OSu-t feloldunk 60 ml DMF-ban és az oldathoz hozzáadunk 1,96 ml (14mmól) trietilamint. A szuszpenziót másnap vákuumban bepároljuk a maradékot vízzel izoláljuk. A 7,83 g súlyú nyersterméket 40 ml etanolban forrón derítjük, majd 40 ml vízzel forrón kicsapjuk. így 6,57 g (84%) kromatográfiásan egységes BOC-Met—Asp(0‘Bu)—D—Phg—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 194—196 °C. Kismennyiségű mintát etanolból átkristályosítunk, ennek olvadáspontja 197—198 °C, R4=0,75, [a]D = —67,2° (c = 1,0, dimetilformamidban). Elemzési eredmények a C2éH40O7N4S összegképlet (molekulasúly: 552,69) alapján: számított: C =56,51%, H =7,30%, N = 10,14%, S =5,78%, talált: C =56,81%, H = 7,34%, N = 9,98%, S =5,69%. 6. lépés L-Metionil-L-aszparagil-D-fenil-glicin-amid-hidroklorid 5,6 g (10,1 mmól) BOC—Met—Asp(OlBu)—D-Phg-NH2-t (1. példa 5. lépés) 10 ml ecetsavban feloldunk, majd 3,5 ml (35 mmól) merkapto-etanolt és 50 ml 4 n sósavas ecetsavat öntünk az oldathoz. 30 perc elteltével a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, és a szilárd maradékot vízmentes éterrel izoláljuk. így 4,84 g, fölös sósavat tartalmazó H-Met-Asp-D-Phg-NH2-ot kapunk (Rf = 0,1), amelyet tisztítás nélkül használunk fel. 7. lépés N-(terc-Butil-oxi-karbonil)-L-triptofil-L--metionil-L-aszparagil-D-fenil-glicin-amid 4,4 g (10,2 mmól) H—Met-Asp—D—Phg—NH2 • • HCl-ot (1. példa 6. lépés) és 4,10 g (10,2 mmól) BOC—Trp—Osu-t 100 ml dimetilformamidban feloldunk, majd az oldathoz hozzáadunk 2,85 ml (20,4 mmól) trietilamint. A szuszpenziót másnap vákuumban bepároljuk, ■ és a maradékot vízzel izoláljuk. így 6,66 g (95,8%) BOC-Trp-Met-Asp-D—Phg—NH2-ot kapunk, olvadáspont 216—218 °C (bomlik). Kismennyíségű mintát 80%-os etanolból átkristályosítunk, bomláspont: 222 °C, R| = 0,3, [a]D =—65,5° (c= 1,0, dimetilformamidban). Elemzési "eredmények a C33H4208N4S összegképlet (molekulasúly: 682,81) alapján: számított: C = 58,05%, H = 6,20%, N= 12,31%, S =4,68%, talált: C =58,23%, H =6,30%, N= 12,60%, S =4,86%. 8. lépés L-Triptofil-L-metionil-L-aszparagil-D-fenil-glicin-amid 6,0 g (88,8 mmól) BOC-Trp-Met-Asp-D-Phg-NH2-ot (1. példa, 7. lépés), 3,1 ml (44 mmól) merkapto-etanol jelenlétében 60 ml sósavas dioxánnal kezelünk. A reakcióelegyet 15 perc elteltével vízmentes éterrel felhígítjuk. A szűréssel izolált 6,23 g hidroklorid sok fölös mennyiségű sósavat tartalmaz, 150 ml vízben szuszpendáljuk, a szuszpenzió pH-ját trietilaminnal 7-re állítjuk, majd keverés után a csapadékot kiszűrjük és vízzel mossuk, így 4,0 g (78%) H—Trp—Met—Asp—D—Phg—NH2-ot kapunk, olvadáspont 230—232° (bomlik) Rj - 0,3. 9. lépés terc-Butil-oxi-karbonil-amino-oxi-ecetsav-(pentaklórfenil)-észter 8,0 g (41,8 mmól) (BOC-OGly-OH-át és 11,1 g (42,0 mmól) pentaklór-fenolt feloldunk 160 ml vízmentes dioxánban, az oldatot 5 °C alá hütjük, és hozzáadunk 8,6 g (42,0 mmól) diciklohexil-karbodiimidet (DCC). A reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd a kivált diciklohexil-karbamidot (DCU) kiszűrjük. A szűrletet vákuumban bepároljuk, és a szilárd maradékot dioxán-etanol elegyből átkristályosítjuk. így 13,7 g (74,3%) BOC—OGly—OPCP-t kapunk, olvadáspont 167-168 °C, Rf = 0,7. Elemzési eredmények a C13Hi2OsNC1s összegképlet (molekulasúly: 439,510) alapján: számított: C = 35,52%, H = 2,75%, N = 3,18%, Cl =40,33%, talált: C =35,37%, H = 2,90%, N = 3,31%, Cl =40,12%. 10. lépés 2-(terc-Butil-oxi-karbonil-amino-oxi)-acetil--L-triptofil-L-metionil-L-aszparagil-D-fenil-glicin-amid 1,50 g (2,57 mmól) H—Trp—Met—Asp—D—Phg-NH2-ot (1. példa, 8. lépés) 15 ml dimetilformamidban szuszpendálunk, majd a szuszpenzióhoz hozzáadunk 2,26 ml (5,14 mmól) trietilamint és 1,20 g (2,73 mmól) BOC-OGly-OPCP-t (1. példa, 9. lépés). A szuszpenziót oldódásig keverjük, majd a reakcióelegyet másnapig állni hagyjuk. Bepárlás után a maradékot éterrel megszilárdítjuk, így az elméletinél több, 2,12 g nyersterméket kapunk. Ezt kevés 5. futtatóelegyben oldva 20 g szüikagélből készült oszlopra visszük fel, és 15 ml/óra sebességgel az 5. futtatóeleggyel eluáljuk. A tiszta frakciókat kétszer 20 ml 80%-os etanolból kristályosítjuk, így 0,82 g (41,4%) BOC-OGly-Trp-Met-Asp-D—Phg—NH2-ot kapunk, olvadáspont 199—200 °C (bomlik), R4 = 0,15, R5 = 0,40, [a]D = -40,3° (c = 1,0, dimetilformamidban). Elemzési eredmények a C35fL,50,0N7S összegképlet (molekulasúly: 755,86) alapján: számított: C = 55,62%, H = 6,00%, N= 12,97%, S =4,24%, talált: C =55,91%, H =6,18%, N = 13,35%, S =4,16%. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
