175151. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenilglicint tartalmazó, gasztrin hatású peptidek előállítására
7 175151 8 5. etil-acetát : (piridin : ecetsav : víz = 20 : 6 : 11 ) 8:2 6. etil-acetát : (piridin : ecetsav : víz = 20 : 6 :11) 7 :3 7. etil-acetát : (piridin : ecetsav : víz = 20 : 6 :11 ) 3:2 8. etil-acetát : (piridin : ecetsav : víz = 20 : 6 :11) 1 :1 9. etil-acetát : (piridin : ecetsav : víz = 20 :6 :11) 2:3 10. etil-acetát : (piridin : ecetsav : víz = 20 : 6 : 11) 85 :15 A vékonyrétegkromatogramok előhívására ninhidrin oldatot használtunk, a permetezést követően körülbelül 5 percig 105 °C-on szárítottuk a lemezeket. Ezt követően a kromatogramokat klórgázba helyeztük, majd szellőztetés után o-tolidin — kálium-jodid-oldattal hívtuk elő. Az anyagok oszlopkromatográfiás tisztításához 62-200 jam szemcseméret-tartományú Kieselgel G szilikagélt használtunk. 1. példa I. lépés N-(Benzil-oxi-karbonil)-D-fenil-glicin-amid 24.0 g (84 mmól) Z-D-Phg-OH-t 170 ml kloroformban feloldunk, az oldathoz hozzáadunk II, 6 ml (84 mmól) trietilamint, majd -10°C-on hozzácsöpögtetünk 8,9 ml (84 mmól) klór-hangyasav-etil-észtert. A vegyes anhidrid oldatát még 10 percig keverjük —10 °C-on, majd 1 órán keresztül - a hűtés megszüntetését követően ammónia gázt vezetünk az oldatba. A reakció elegy et másnap vákuumban bepároljuk, a szilárd maradékot vízzel izoláljuk. A nyersterméket etanolból kristályosítjuk, Így 11,8 g (49,4%) kromatográfiásan egységes Z—D—Phg—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 171—173 °C, Rf =0,75, [a]D= —76,8° (c=l,0, dimetilformamidban). Elemzési eredmények a C,éHiS03N2 összegképlet (molekulasúly: 284,30) alapján: számított: C =67,59%, H =5,67%, N = 9,85%, talált: C =67,43%, H = 5,70%, N = 9,98%. 2. lépés D-Fenil-glicin-amid-hidrobromid 20.0 g (70 mmól) Z-D-Phg-NH2-t (1. lépés) feloldunk 40 ml ecetsavban, és az oldathoz 70 ml 8 n hidrogén-bromidos ecetsavat öntünk. 1 óra múlva a reakcióelegyet éterrel felhígítjuk, és a hidrobromidot kiszűrjük. A nagy fölöslegű hidrogén-bromidot tartalmazó sót tízszeres mennyiségű etanolból átkristályosítjuk. így 14,15 g (87,5%) H-D—Phg—NH2-ot, op.: 263,0—263,5 °C Koffler-készüléken mérve, Rf = 0,40, Rf = 0,25 HBr-é [a]D =-75,6° (c = l,0, dimetilformamidban). Elemzési eredmények a C8Hi0ON2Br összegképlet (molekulasúly: 231,10) alapján: számított: C =41,60%, H =4,77%, N = 12,13%, talált: C =41,40%, H =4,82%, N = 12,01%. 3. lépés N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-aszparagil-0--(terc-butilészter)-D-fenil-glicin-amid 6,31 g Z-Asp(0‘Bu)-OSu-t, 3,89 g (16,8 mmól) H—D—Phg—NH2 • HBr-ot (1. példa, 2. lépés) és 2,10 ml (15 mmól) trietilamint 150 ml kloroformban szuszpendálva reagáltatunk. Másnap a sűrű szuszpenziót vákuumban bepároljuk, és a maradékot etanolból átkristályosítjuk. így 5,02 g (73,6%) kromatográfiásan egységes Z-Asp-(OtBu)-D—Phg-NH2-ot kapunk, olvadáspont: 179-181 °C. Kismennyiségű mintát etil-acetátból átkristályosítunk, ennek olvadáspontja: 188-189 °C, Rf=0,75, [a]D = -59,5° (c = 1,0, dimetilformamidban). Elemzési eredmények a C24H2904N3 összegképlet (molekulasúly: 455,50) alapján: számított: C =63,28%, H =6,42%, N = 9,23%, talált: C =63,22%, H =6,60%, N = 8,96%. 4. lépés L-Aszparagil-/3-(terc-butil-észter)-D-fenil-glicin-amid-hidroklorid 12,83 g (28,2 mmól) Z-AspíO'BuKD-Phg-NH2-ot (1. példa, 3. lépés) 200 ml DMF-ban feloldunk, hűtés közben hozzáadunk 2,46 ml (28,2- mmól) tömény sósavoldatot, majd 2 g 10%-os csontszenes Pd-katalizátort. A szuszpenzión keverés közben hidrogén-gázt buborékoltatunk át 2,5 órán keresztül. A katalizátor kiszűrése után a szűrletet bepároljuk, a maradékot etanolban oldva derítjük, majd az etanol vákuumban való eltávolítása után a maradékot éterrel megszilárdítjuk. így 10,0 g (99%) kromatográfiásan egységes H-AspíÓ'Buj-D-Phg—NH2 • HCl-t kapunk, olvadáspont 169—170 °C. Rf = 0,15. 5. lépés N-(terc-Butil-oxi-karbonil)-L-metionil--L-aszparagil-0-(terc-butil-észter)-D-fenil-glicin-amid 5,0 g (14 mmól) H-Asp(OtBu)-D-Phg-NH2 - -ot (1. példa, 4. lépés) és 4,85 g (14 mmól) BOC-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
