174967. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ribo- és 2'-dezoxiribo-nukleozid-5'-polifoszfátok előállítására
7 174967 8 vízben oldjuk és az oldatot 0 °C-ra hűtjük, majd addig adunk hozzá 10 n nátrium-hidroxid oldatot, amíg az oldat pH-ja 11 lesz. A közben kivált nátrium-foszfátot kiszűijük. A szűrletet elválasztjuk a tributilamintól és a vizes fázist lehűtjük —10 ®C-ra. Ekkor az oldathoz adunk 120 ml 10 n nátrium-hidroxid oldatot, amelynek hatására a 4-morfolino-N,N’-diciklohexilkarboxamidin bázis (továbbiakban B bázis) kiválik. Ezt kiszűrjük és a szűrlet pH-ját 1:1 hígítású sósav oldattal 3,5—4-re savanyítjuk, majd ezt az oldatot ötszörös mennyiségű metanolba csurgatjuk. Az ekkor kivált dtidin-S’-difoszforsav-dinátriumsót kiszűijük és 5:1 arányú metanol-víz eleggyel kloridmentesre mossuk. Ezután a csapadékot háromszoros csapadéktérfogatnyi metanollal és éterrel mossuk. Foszfor-pentoxid felett szobahőmérsékleten vákuumban szárítjuk. A termék súlya: 18—22 g (43—53%). Anyagtartalom UV elnyelés alapján min. 95%. Az E 250/260, valamint az E 280/260 extinkció hányadosok értéke 0,45 és 2,05 (az irodalomban közölt értékek 0,46 és 2,07) pH=2 esetén. Elektroforetikusan vizsgálva az alacsonyabban foszforilezett termékek összessége nem haladhatja meg az 5%-ot. 4. példa Inozin-5’-trifoszforsav-nátriumsó 299 g (0,5 mól) tributilammóniumpirofoszfátot feloldunk 100 ml dimetilformamid és 1300 ml tetrahidrofurán oldószerben. Ezt az oldatot keverés közben felmelegítjük 55 “C-ra, majd 8—9 óra alatt hozzácsepegtetjük 71 g (0,1 mól) inozin-5’-foszformorfolidát 100 ml dimetilformamiddal és 200 ml tetrahidrofuránnal készült oldatát. A becsepegtetés után még 8—10 órás utókeverést alkalmazunk 30 “C-on. A reakció befejeztével a reakcióelegyet vákuumban 40 °C-on térfogatának 45%-ára bepároljuk. A bepárlási maradékot 500 ml vízben oldjuk és az oldatot lehűtjük 0 “C-ra. Ekkor az oldat pH-ját 11-re állítjuk be, 10 n nátriumhidroxid oldattal úgy, hogy a közben kivált nátrium-pirofoszfátot szűréssel eltávolítjuk. A szűrletet elválasztjuk a tributüamintól és a vizes fázist lehűtjük —10 “C-ra. Ekkor az oldathoz 160 ml 10 n nátrium-hidroxid oldatot adunk, amelynek hatására a B bázis kiválik. Ezt kiszűijük és a szűrletet 1:1 sósav oldattal pH-5-re savanyítjuk. Ezt az oldatot ötszörös mennyiségű metanolba öntjük, amikor a végtermék nátriumsója kiválik. Szűrés és kloridmentesre történő mosás után foszfor-pentoxid felett szárítjuk, vákuumban. A termék súlya: 22—25 g (54—62%), minősége megfelel a 3. példában leírt követelményeknek. Az E 250/260 és E 280/260 értékek 1,69 és 0,25 (irodalmi értékek 1,68 és 0,25) pH=6 esetén. 5. példa Adenozin-5 ’-tetrafoszforsav-trinátriumsó 258 g (0,5 mól) tributilammóniumortofoszfátot feloldunk 1300 ml tetrahidrofurán és 100 ml metilcelloszolv oldószerekben. Ezt az oldatot keverés közben lassan 45 "C-ra melegítjük, majd 8—9 óra alatt hozzácsepegtetjük 130 g (0,1 mól) adenozin-5’-trifoszformorfolidát 100 ml tetrahidrofuránnal és 100 ml metilcelloszowal készült oldatát. A becsepegtetés után még 7-8 órás utókeverést végzünk 30 “C-on. A reakció befejeztével a reakcióelegyet vákuumban 40 *C-on térfogatának 50%-ára bepároljuk. A bepárlási maradékot feloldjuk 500 ml vízben, majd az oldatot 0 “C-ra hűtjük. Az oldat pH-ját ekkor 10 n nátrium-hidroxid oldattal 11-re állítjuk be és a közben kivált nátrium-foszfátot kiszűrjük. A szűrletet elválasztjuk a tributilamintól és a vizes fázist lehűtjük —10 *C-ra. Ekkor 200 ml 10 n nátrium-hidroxid oldatot adunk hozzá, amikor a B bázis leválik, amelyet szűréssel távolítunk el. A szűrlet pH-ját ezután 1:1 hígítású sósav oldattal 5-re állítjuk be és a végterméket ebből az oldatból ötszörös mennyiségű metanollal csapjuk ki. Kloridmentesre történő mosás után foszfor-pentoxid felett szobahőmérsékleten vákuumban szárítjuk. A termék súlya: 28—35 g (41—51%), minősége megfelel a 3. példában leírt követelményeknek. Az E 250/260 és E 280/260 értékek 0,88 és 0,24 (irodalmi értékek 0,90 és 0,25) pH=2 esetén. 6. példa Adenozin-5’-difoszfát-ciklohexilammóniumsó 47,2 g (0,1 mól) adenozin-5’-difoszforsav-dinátriumsót feloldunk 200 ml desztillált vízben és 0 “C hőmérsékleten addig adunk hozzá Amberlite IR 120 (H*) gyantát, amíg az oldat pH-ja eléri az 1—1,5 értéket. Ekkor a gyantát kiszűrjük és vízzel pH=4,5-ig mossuk. Az egyesített szűrletek pH-ját ciklohexilaminnal 7,5-re állítjuk be. A semleges vizes oldatot vákuumban 45 “C-on szárazra pároljuk, majd kétszer 100 ml abszolút etanollal szárítjuk. A bepárlási maradékot 50 °C-on 500 ml metanolban oldjuk, a nem oldódó részt azonnal kiszűijük. A szűrletet éterrel telítjük és azonnal hidegre tesszük. 2—3 nap múlva a kivált kristályokat kiszűrjük. Jegelt metanollal mossuk, foszfor-pentoxid felett vákuumban szobahőmérsékleten szárítjuk. A termék súlya: 27-30 g (57-63%), minősége megfelel a 3. példában leírt követelményeknek. Az E 250/260 és E 280/260 értékek 0,85 és 0,21 (irodalmi értékek 0,85 és 0,21) pH=2 esetén. 7. példa Uridin-5 ’-trifoszforsav-trinátriumsó 299 g (0,5 mól) tributilammóniumpirofoszfátot feloldunk 100 ml metanol és 1100 ml abszolút ortohangyasavas-etilészter elegyében. Ezt az oldatot erőteljes keverés közben 45 “C-ra melegítjük, majd 7—8 óra alatt hozzácsepegtetjük 68,67 g (0,1 mól) uridin-5 ’-foszformorfolidát 100 ml metanollal és 200 ml otrohangyasavas-etilészterrel készült oldatát. A becsepegtetés után még 8—9 órai utókeverést végzünk ugyanezen a hőmérsékleten. A reakció befejeztével az oldószerek 60%-át vákuumban 60 *C-on lehajtjuk. A bepárlási maradékot feloldjuk 500 ml desztillált vízben és ezt az oldatot 0 “C-ra hűtjük. Ezután az oldat pH-ját 10 n nátrium-hidroxid oldattal állítjuk be 11-re és a közben kivált nátriumpirofoszfátot kiszűrjük. A 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
