174967. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ribo- és 2'-dezoxiribo-nukleozid-5'-polifoszfátok előállítására
9 174967 10 szűrletet a tributilamintól elválasztva lehűtjük —5 és —10 ®C közötti hőmérsékletre, majd hozzáadunk 160 ml 10 n nátrium-hidroxid oldatot, amelynek hatására a B bázis először gumis, majd kristályos formában kiválik. Szűrés után a szűrlet pH-ját tömény sósav oldattal 5,5-re savanyítjuk, majd ebből az oldatból ötszörös mennyiségű metanollal a végtermék nátriumsóját kicsapjuk. Szűrés és kloridmentesre történő mosás után a terméket metanollal, majd éterrel mossuk. Foszfor-pentoxid felett szobahőmérsékleten vákuumban szárítjuk. A termék súlya: 27-32 g (50-60%), minősége megfelel a 3. példában leírt követelményeknek. Az E 250/260 és E 280/260 értékek 0,76 és 0,37 (irodalmi értékek 0,75 és 0,38) pH=2 esetén. 8. példa 2’-Dezoxi-adenozin-5’-difoszforsav-dinátriumsó 258 g (0,5 mól) tributilammóniumortofoszfátot feloldunk 100 ml metilcelloszolv és 1300 ml abszolút tetrahidrofurán oldószerelegyben. Ezt az oldatot 60 *C-ra melegítjük és a keverést megindítva 8—9 óra alatt hozzácsepegtetjük 69,4 g (0,1 mól) 2’-dezoxi-adenozin-5’-foszformorfolidát 100 ml metilcelloszolwal és 200 ml abszolút tetrahidrofuránnal készült oldatát. A becsepegtetés után még 8—10 órás utókeverést alkalmazunk 35—40 °C-on, majd a reakcióelegyet vákuumban 45 8C-on térfogatának 50%-ára bepároljuk. A bepárlási maradékot 500 ml vízben feloldjuk, az oldatot 0 °C-ra hütjük és addig adunk az oldathoz 10 n nátrium-hidroxid oldatot, amíg az oldat pH-ja 11 nem lesz. A közben kivált nátrium-foszfátot kiszűrjük, majd a szűrletet a tributilamintól elválasztjuk. A vizes fázist lehűtjük —10 °C-ra, majd hozzáadunk 120 ml 10 n nátrium-hidroxid oldatot erős keverés közben, hogy a bázist leválasszuk. A bázis kiszűrése után a szűrlet pH-ját tömény sósav oldattal visszaállítjuk 5-re erős hűtés és keverés közben, majd ebből az oldatból csapjuk ki ötszörös oldattérfogatnyi metanolt alkalmazva a végtermék nátriumsóját. A végterméket kiszűrjük, kloridmentesre mossuk 5:1 arányú metanol-víz eleggyel, majd metanollal, végül éterrel mossuk. Foszfor-pentoxid felett vákuumban szobahőmérsékleten szántjuk. A termék súlya: 23—25 g (53—57%), minősége megfelel a 3. példában leírt követelményeknek. Az E 250/260 és E 280/260 értékek 0,81 és 0,15 (irodalmi értékek 0,80 és 0,15) pH=7 esetén. 9. példa 2’-Dezoxi-citidm-5’-trifoszforsav-trinátriumsó 299 g (0,5 mól) tributilammóniumpírofoszfátot feloldunk 100 ml abszolút metanol és 1000 ml abszolút ortohangyasavas-etilészter oldószerelegyben. Az oldatot 45 °C-ra felmelegítve mintegy 8 óra alatt becsepegtetjük 67 g (0,1 mól) 2’dezoxi-citidin-5 ’-foszformorfolidát 100 ml abszolút metanollal és 200 ml ortohangyasavas-etilészterrel készült oldatát. A becsepegtetés után még 8—10 órás utókeverést biztosítunk 35 *C-on. A reakció befejeztével a reakcióelegyet vákuumban 60 *C-on térfogatának 4%-ára bepároljuk, majd a bepárlási maradékot feloldjuk 500 ml vízben és a vizes oldatot 0 °C-ra hűtjük. Ehhez az oldathoz adunk 10 n nátrium-hidroxid oldatot addig, amíg az oldat pH-ja 11 nem lesz. A közben kivált nátriumpirofoszfátot kiszűrjük, a szürletet a tributilamintól elválasztjuk. A vizes fázist lehűtjük —10 °C-ra, majd hozzáadunk 160 ml 10 n nátrium-hidroxid oldatot a B bázis leválasztása céljából. Ez utóbbit kiszűrjük, majd a szűrletet visszasavanyítjuk pH=5—5,5-re tömény sósav oldattal erős hűtés és keverés közben. Ebből az oldatból ötszörös mennyiségű metanollal csapjuk ki a végterméket. Kloridmentesre mosás (metanol—víz = 5:1) után metanollal, majd éterrel mossuk, szobahőmérsékleten foszfor-pentoxid felett vákuumban szárítjuk. A termék súlya: 26—30 g (49—57%), minősége megfelel a 3. példában leírt követelményeknek. Az E 250/260 és E 280/260 értékek 0,43 és 2,08 (irodalmi értékek 0,44 és 2,10) pH=2 esetén. 10. példa 2’-Dezoxi-5-jód-uridin-5’-difoszforsav-dinátriumsó 129 g (0,25 mól) tributilammóniumortofoszfátot feloldunk 50 ml metilcelloszolv és 500 ml abszolút tetrahidrofurán oldószerben. Ezt az oldatot felmelegítjük 50 °C-ra, majd erős keverés közben mintegy 8 óra alatt hozzácsepegtetjük 39,9 g (0,05 mól) 2’-dezoxi-5-jód-uridin-5’-foszformorfolidát 50 ml metilcelloszolvval és 100 ml abszolút tetrahidrofuránnal készült oldatát. A becsepegtetés után még 8—10 órás utókeverést végzünk 40 °C-on. A reakcióelegyet ezután vákuumban 40 °C-on térfogatának 50%-ára bepároljuk, majd a bepárlási maradékot feloldjuk 200 ml vízben és az oldatot lehűtjük 0 °C-ra. Ekkor az oldathoz annyi 10 n nátrium-hidroxid oldatot adunk, hogy pH-ja 11 legyen. A közben kivált nátrium-foszfátot kiszűrjük és a szűrletet a tributilamintól elválasztjuk. A vizes fázishoz 60 ml 10 n nátrium-hidroxid oldatot adunk —10 aC-on erős keverés közben. A lúg hatására levált B bázist kiszűrve a szűrletet ugyanezen hőfokon tömény sósavoldattal erős keverés közben pH=5,5-re visszasavanyítjuk. Ebből a vizes oldatból csapjuk ki a végtermék nátriumsóját ötszörös feleslegű metanollal. Szűrés után a csapadékot kloridmentesre mossuk 5:1 arányú metanol-víz eleggyel, majd a csapadékot metanollal, végül éterrel mossuk és foszfor-pentoxid felett vákuumban szobahőmérsékleten szárítjuk. A termék súlya: 12-16 g (43—57%), minősége megfelel a 3. példában leírt követelményeknek. Az E- 250/260 és 280/260 értékek 0,60 és 2,02 (irodalmi értékek 0,59 és 2,04) pH=2 esetén. 11. példa Guanozin-5 ’-difoszforsav-dinátriumsó 258 g (0,5 mól) tributilammónium-ortofoszfátot feloldunk 300 ml abszolút acetonitril és 3000 ml formamid elegyében. Ezt az oldatot 45-47 *C-ra 5 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
