174931. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hústermelő háziállatoknak orális úton beadható készítmény előállítására
5 174931 6 C) Fiziológiai tulajdonságok Kizárólagos lieb agaron) glükóz xilóz arabinóz ramnóz fruktóz gal aktóz raffmóz mannit inozit szalicin szénforrás értékelése (Pridham/Gott+ + + + + + + + 10 Találmányunk további részleteit a példákban ismertetjük anélkül, hogy azt a példákra korlátoznánk. Az 1—3. példában a mitramicin-keverék előállítását és a 4—5. példában a tisztítását mutatjuk be. 1. példa Streptomyces pilosus NCIB 11 238 törzset orvosságos üvegekben ferde tripton élesztő agar tenyészetben 7 napon át 32 °C-on tenyésztünk. A micéliumot és a spórákat minden ferde tenyészetből 100 ml steril vízzel 2 literes üvegbe kapaijuk be, mely 1 liter alábbi összetételű táptalajt tartalmaz: ± (nagyon gyenge) szacharóz ± (gyenge) 15 Glicerin 5,0 súly/tf% Pepton (Difco védjegy) 0,5 súly/tf% Hidrolízis Kalciumkarbonát 0,1 súly/tf% zselatin + Káliumdihidrogénortofoszfát 0,024 sűly/tf% keményítő + kazein (tej agar) + 20 Magnéziumszulfátheptahidrát 0,02 súly/tf% Nyomelem-koncentrátum 0,1 súly/tf% Lakmusz tejre kifejtett hatás Ionmentesített vízzel 100 ml-re hígítva. Peptonizálás és savtermelés. Nem szilárdul meg. Növekedési hőmérsékletek Növekedés élesztő maláta agaron 14 nap után az alábbi hőmérsékleteken: 25 A nyomelem-koncentrátum összetétel a következő: Ferroszulfát-heptahidrát 0,1 súly/tf% 2 *C 5 *C 10 °c 15 °C 20 eC Kupriszulfát-pentahidrát 30 Cinkszulfát-heptahidrát 0,015 0,1 súly/tf% súly/tf%_ ± + + Mangánszulfát-tetrahidrát 0,01 súly/tf% 25 *C 30 °C 37 °C 45 °C 55 °C Káliummolibdenát Ionmentesített vízzel 0,01 100 súly/tf% ml-re hígítva. + + + + Az eljárásnál asszimilálható szénforrásként pl. többértékű alkoholokat (pl. glicerin, glükóz, xilóz, arabinóz, ramnóz, fruktóz, galaktóz, mannit vagy inozit) előnyösen glicerint alkalmazhatunk. A táptalaj glicerintartalma előnyösen 2—5 súly/tf%. Asszimilálható nitrogénforrásként pl. peptont alkalmazhatunk, melyet előnyösen 0,5—2,0 súly/tf% mennyiségben adhatunk a táptalajhoz. A táptalaj továbbá kis mennyiségben más elemeket (pl. foszfort éspedig előnyösen káliumdihidrogénortofoszfát vagy diammóniumhidrogénfoszfát alakjában; magnéziumot pl. magnéziumszulfát vagy magnéziumkarbonát alakjában; ként pl. szulfátsók alakjában; káliumot pl. káliumklorid vagy káliumdihidrogénortofoszfát alakjában) és nyomnyi mennyiségben a fenti elemek sóit (pl. réz-, cink-, vas-, mangán- és molibdénsókat) tartalmaz. A fermentáció hőmérséklete előnyösen 32 °C. A savas terméket a fermentlé szűrletéből szokásos módszerekkel extraháljuk pl. oly módon, hogy a szűrletet vízzel nem-elegyedő szerves oldószerrel semleges vagy bázikus pH-n extraháljuk a nem-kívánatos semleges és bázikus termékek eltávolítása céljából, majd a vizes fázist megsavanyítjuk és a kívánt savas terméket vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel extraháljuk. A savas tennék tisztítása oly módon történhet, hogy a savas terméket vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel képezett oldatában magnéziumszilikáttal hozzuk érintkezésbe és magnéziumkeláttá vagy sóvá alakítjuk. 35 A sókat az ionmentesített víz egy részéhez adjuk, majd az elegyet megfelelő mennyiségű tömény sósav és ionmentesített víz elegyével megsavanyítjuk. Az oldatot autoklávban atmoszferikus nyomáson félórán át sterilezzük. 40 Az ily módon előkészített négy egyenként kétliteres üveget 32 °C-on 2 napon át rázatjuk. A négy lombik tartalmát egyesítjük és fermentorban levő 80 liter alábbi összetételű táptalajba oltjuk: Glicerin 5,0 súly/tf% 45 Kalciumkarbonát 0,1 súly/tf% Káliumdihidrogénortofoszfát 0,024 súly/tf% Magnéziumszulfát-heptahidrát 0,02 súly/tf% Nyomelem-koncentrátum (fentiekben megadott összetételű) 0,1 súly/tf% 50 Pepton (Difco védjegy) 0,5 súly/tf% Ionmentesített vízzel 100 ml-re hígítva A táptalajt autoklávban atmoszferikus nyomáson félórán át sterilezzük. A fermenter tartalmát 32 55 °C-on 45 órán át keverjük 6 lapos lemezt tartalmazó turbina segítségével percenként 260 fordulattal és 40 liter/perc sebességgel levegőztetjük. Habzásgátlás céljából szükség esetén polipropilént adunk hozzá. A fermentlevet szűrjük és a szűrletet (pH kb. 7,3) 25 60 liter etilacetáttal extraháljuk; az etilacetátos extraktumot elöntjük. A vizes fázist 5 n sósavval pH=3,5 értékre savanyítjuk, majd 2 x 25 liter etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos extraktumot egyesítjük, nátriumszulfát felett szárítjuk, szűrjük és a szűrletet vá- 65 kuumban 1 literre bepároljuk. A kívánt terméket a 3
