174918. lajstromszámú szabadalom • Eljárás poliriboinozin-poliribocitidilsav, poli-L-lizin és karboximetilcellulóz nukleáz-rezisztens hidrofil komplexének vizes oldat formájában való előállítására
3 174918 4 Célul tűztük ki tehát a nagy molekulasúlyú In.Cn olyan hidrofil komplexének előállítását, amely viszonylag ellenálló nukleázokkal szemben, belőle nem toxikus és nem antigén jellegű injektálható készítmények készíthetők és ezek az injektálható készítmények alkalmasak arra, hogy főemlősöknek beadva az interferonok szintézisét indukálják olyan mértékben, hogy azok víruselleni hatást mutassanak. Azt találtuk, hogy a fenti követelményeknek megfelelő In.Cn komplex állítható elő, ha nagy molekulasúlyú In.Cn-t viszonylag kis molekulasúlyú poli-L-lizinnel és karboximetücellulózzal komplexbe viszünk. A komplex előállításához használt In.Cn molekulasúlya mintegy 7 • 10s dalton és mintegy 1 • 107 dalton, míg az ugyanezen célra használt poli-L-lizin molekulasúlya mintegy 13 000 és mintegy 25 000 közötti lehet. Közelebbről a komplexet a találmány értelmében úgy állítjuk elő, hogy elkészítjük a komplexet alkotó három komponens oldatát valamilyen gyógyászatiig elfogadható vizes vivőanyaggal, például lázkeltőktől mentes fiziológiás sóoldattal, majd először a poli-L-lizin oldatát keverjük össze a karboximetilcellulóz oldatával, előnyösen úgy, hogy keverés közben az előbb említett oldatot hozzáöntjük az utóbb említett oldathoz, majd pedig a keverést addig folytatjuk, míg az összeöntéskor képződő csapadék teljes mennyiségben újraoldódik. A legjobb eredmények elérésére célszerűen úgy járunk el, hogy a keverést olyan hosszú időn át folytatjuk, mig az oldat minimális zavarosságát elérjük. Ehhez rendszerint 2-3 napon át tartó keverésre van szükség. A poli-L-lizin-karboximetilcellulóz komplex, vagyis a közbenső komplex így kapott oldatához ezután hozzáadjuk az In.Cn oldatát, ezt követően pedig előnyösen 2-3 napon át tartó keverést végzünk a találmány szerinti komplex végső oldatának előállítására. A semleges pH-értéken negatív töltésű, hidrofil karboximetilcellulóz a találmány szerinti komplex alapvető komponense, minthogy nélküle az In.Cn és a poli-L-lizin kezelhetetlen csapadékot képezne. Sőt, a találmány szerinti komplex komponenseinek fentemlített adagolási sorrendje (azaz először a poli-L-lizin és a karboximetilcellulóz komplexének előállítása, majd a komplex oldatához az In.Cn hozzáadása) is lényeges paraméter a találmány szerinti komplex előállíthatósága szempontjából, minthogy bármely más adagolási sorrend esetében elkerülhetetlenül kezelhetetlen csapadék képződik. A találmány szerinti, vizes oldat (oldószerként tehát vizet vagy gyógyászatilag elfogadható alkálifémsó vizes oldatát használjuk) formájában kapott és elsősorban injektálással beadható komplexek előállításához olyan koncentrációjú vizes oldatokat használunk, hogy végül l-4mg/ml In.Cn-t, 0,75-3,0 mg/ml poli-L-lizint és 0,25-1 súly% karboximetilcellulózt tartalmazó végső oldatot kapjunk. Különösen előnyösnek bizonyult injektálható preparátumként olyan, fiziológiás sóoldattal készült oldat, amely 2 mg/ml In.Cn-t, 1,5 mg/ml poli-L-lizint és 0,5 súly% karboximetilcellulózt tartalmaz. A találmány szerinti, In.Cn-t tartalmazó komplexek pankreatikus ribonukleáz vagy emberi vérszérum által kiváltott hidrolízissel szemben 4-10-szer ellenállóbbak, mint a komplexbe nem vitt In.Cn. Ha a találmány szerinti komplexet injekció útján állati főemlősöknek, például rézuszmajmoknak vagy csimpánzoknak In.Cn-re nézve mintegy 1—5 mg/ /testsúlykg szervezetbeli koncentrációt biztosító dózisban beadjuk, akkor a komplex nem bizonyul sem toxikusnak, sem antigén jellegűnek, ugyanakkor pedig kiváltja az interferonok képződését olyan szinten, hogy víruselleni hatás észlelhető. így például a találmány szerinti komplexeket oldat formájában az említett dózisokban injekció útján beadva főemlősökben (és feltételezhetően emberben is) hatásos védelem érhető el olyan vírusos megbetegedések ellen, mint a sárgaláz, fertőző májgyulladás, vírusos agyvelőgyulladás és veszettség, továbbá állati főemlősökben hatásos védelem érhető el majmoknál jelentkező, vírusok okozta vérzéses lázzal (angolul: Simian hemorrhagic fever) szemben is. Az injektálást előnyösen intravénásán vagy a gerincvelőburkon át végezzük, éspedig előnyösen másnaponként vagy naponta olyan dózisban, hogy állati főemlősöknél a szervezetben In.Cn-re nézve mintegy 3 mg/testsúlykg, míg az emberi szervezetben In.Cn-re nézve mintegy 1 mg/testsúlykg koncentráció legyen elérhető. A találmány szerinti komplexek továbbá feltételezhetően alkalmasak emberek és más főemlősök esetében helyi alkalmazással különböző vírusos herpeszmegbetegedések, például herpeszes keratokonjunktivitisz (ez esetben minden hat órában a találmány szerinti komplex fent említett preparátumából 1 -2 cseppet alkalmazunk), a nemiszervek vírusos herpeszmegbetegedése és ajaksömör kezelésére, továbbá inhalálással történő beadással a légzőszervrendszer különböző vírusos megbetegedéseinek, például a közönséges náthának és az influenzának kezelésére. A találmányt közelebbről az alábbi kiviteli példákkal kívánjuk megvilágítani. A példákban használt In.Cn-t a P-L Biochemicals cégtől beszerezhető poliriboinozinsav és poliribocitidilsav közel ekvimoláris keverékéből állítjuk elő. Mind a poliriboinozinsav, mind a poliribocitidilsav méretében heterogén, molekulasúlyuk pedig több, mint 100 000. A két savat feloldjuk 4 ml/ml koncentrációban 0,85%-os vizes nátrium-klorid-oldatban, majd a kétféle oldatot 30 °C-ra felmelegítjük és állandó keverés közben a poliribocitidilsav oldatát hozzáöntjük a poliriboinozinsav oldatához. Közel 35%-os Mpokróm eltolódás észlelhető, jelezve, hogy kialakult a bázis-párú, kettős spirálú szerkezet. 1. példa 0,85%-os, lázkeltőktől mentes fiziológiás sóoldattal az alábbi oldatokat készítjük el: In.Cn-t 4 mg/ml koncentrációban tartalmazó oldatból 500 ml, 2% karboximetilcellulózt a Hercules Powder Co., Wilmington, Daleware állam, amerikai egyesült államokbeli cég által „7 HSP” márkanéven forgalomba hozott nagy viszkozitású karboximetilcellulóv tartalmazó oldatból 250 ml és poli-L-lizint (molekulasúlya 22 000) a 6 mg/ml koncentrációban 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
