174887. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gonococcus szálak előállítására
35 174887 36 IV. táblázat A hemagglutinációs vizsgálat eredményei Bemélyedés száma A 3-2 és M-2 szálak végső koncentrációja Első kísérletsorozat az agglutináció mértéke 3-2 M-2 szálak szálak A 3-2 szálak végsőkoncentrációja Az agglutináció mértéke 3-2 szálak Második kísérletsorozat az M-2 szálak végső koncentrációja Az agglutináció mértéke M—2 szálak 1. 333 7/ml 5+ 5+ 450 7/ml 5+ 92 7/ml 5+ 2. 166,6 7/ml 4+ 4* 225 7/ml 5+ 46 7/ml 5+ 3. 83,3 7/ml 3+ 4+ 112,5 7/ml 5+ 23 7/ml 5+ 4. 41,6 7/ml 2/3+ 4+ 56 7/ml 4+ 11,57/ml 4+ 5. 20,8 7/ml ± 3+ 28 7/ml + 5,8 7/ml + 6. 10,4 7/ml 0 3+ 14 7/ml 0 2,9 7/ml + 7. 5,2 7/ml 0 2+ 78 7/ml 0 1,4 7/ml 0 8. 2,6 7/ml 0 ± 3,5 7/ml 0 0,7 7/ml 0 9. 1,3 7/ml 0 0 1,75 7/ml 0 0,35 7/ml 0 10. 0,6 7/ml 0 0 0,88 7/ml 0 0,17 7/ml 0 11. 0,3 7/ml 0 0 0,44 7/ml 0 0 12. 0,15 7/ml 0 0 0,22 7/ml 0 0 Módszerek: Abból a célból, hogy kiküszöböljük magának a szérumnak a háttér hemagglutinációját, 0,1 ml hígítatlan, kimosott vörösvérsejtet adtunk 1 ml antiszérumhoz gömbölyű aljú, üveg centrifugacsőben. A csöveket parafmnal légmentesen lezártuk és függőleges helyzetben egy Yankee Rotator berendezésen rögzítettük 4 °C-on. 1 óra 10 perc elteltével 2400 fordulat/perc sebességgel pörgettük egy hűtött International centrifugában, és megvizsgáltuk a hemagglutinációs képességet. A szérumokat/ ezután tovább tisztítottuk 12 KG intenzitással történő centrifugálással, Sorvall RC-2 típusú centrifuga alkalmazásával. Az V. táblázatban mutatjuk be a háttér hemagglutinációs tényezők abszorpcióját különböző hígításokban, az antiszérum vörösvérsejtekkel történő kezelése előtt és után. Az antitest/antigén komplexek eltávolítása módon állítottuk elő hígítószerként fiziológiás sóoldatot alkalmazva. Mindegyik hígításból 0,1 ml-es alikvot részt adtunk 0,1 ml 100 gamma/ml töménységű CDC M-2 szálakhoz 1,5 ml térfogatú Micro- 45 füge centrifugacsövekben. A centrifugacsöveket 1 órán át inkubáltuk 37 °C-on függőleges helyzetben egy Yankee Rotator berendezésben, majd egy percig pörgettük őket a Beckman Microfuge centrifugában. A tiszta folyadéknak valamivel több, mint 50 a felét eltávolítottuk, és mindegyik antiszérum-hígításból 50 mikrolitert mértünk be egy Microtitre lemez bemélyedéseibe. 25 mikroliter 3%-os vörösvérsejtet adtunk hozzá (foszfátpuffert tartalmazó sóoldatban), a lemez óvatos mozgatásával elegyítjük 55 és 1 órán át 4 °C-on tartjuk. Az eredményeket a VI. táblázatban mutatjuk be. Ha a CDC M—2 szálak helyett más szálakat használunk, ugyancsak hasonló eredményeket ka- 60 punk az alkalmazott szálakkal szemben antitesteket tartalmazó szérumokkal. Vörösvérsejt-adszorpció utáni preimmun és anti—CDC M—2 nyúlszérumok hígítássorozatát a fenti 65 18
