174887. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gonococcus szálak előállítására
29 174887 30 A GC szálakat kénsawal feltártuk, és meghatároztuk a foszfortartalmat káliumdihidrogénfoszfát-oldathoz képest az ammóniummolibdát-aszkorbinsavas módszerrel. A Pittsburgh 3—2 ATCC 31149 törzs szálaira kapott átlagérték 0,332 ± 0,026%, a CDC B-2 törzs szálaira kapott átlagérték pedig 0,336 ± 0,048% volt. Ezek az értékek protein alegységenként 2,5 illetve 2,3 foszforatomot jeleznek. 13. példa A T2 típusú szál kristályok aminosav-analízise [Spackman és munkatársai módosított módszere, Anal. Chem., 30, 1190 (1958)]. Az analízist Beckman Spinco Model 120B típusú aminosav-analizáló berendezés segítségével végeztük el. Belső standardként norleucint és 2-amino-3-guanidino-propionsavat használtunk. 10 mg protein mintát tömény sósavval (6N) 110°C-on hidrolizáltunk 24 órán át evakuált ampullákban 0,025 Hgmm nyomáson. A triptofán meghatározására Bence és munkatársai színképes módszerét alkalmaztuk [Anal. Chem., 29, 1193 (1957)]. Az analízis az alábbi eredményeket szolgáltatta: Aminosav típusa Aminosav száma aszparaginsav + aszparaginsavamid 26 alanin 23 glutaminsav + glutaminsavamid 21 lizin 20 glicin 17 valin 17 szerin 14 leucin 12 treonin 9 izoleucin 9 arginin 8 tirozin 7 prolin 6 triptofán 4-5 hisztidin 3 1/2 cisztin 2 Táblázat folytatása Aminosav típusa Aminosav száma metionin 2 fenilalanin 2 Az aminosavak száma: 200 ± 9. Átlagos molekulasúly: 21 500 + 1000 dalton. 14. példa Fizikai tulajdonságok Oldhatóság A GC szál kristályok, amelyek elektronmikroszkóp alatt szál pálcikák kötegei formájában jelennek meg, körülbelül az 5,5-9,3 közötti pH-tartományban kristályosak. A T2 változat kristályai 9,3—10,1 közötti pH-értékeknél kezdenek különálló szál pálcikákká átalakulni. 10,1 feletti pH-értéken különálló szál pálcikák formájában vannak jelen. Hasonló módon, a T [ szálak kristályai 7,7 pH-értéknél kezdenek különálló szál pálcikákká átalakulni, és 8,6 feletti pH-értéken pálcikák alakjában vannak jelen, azaz a kristályok teljesen dezaggregálódtak. Körülbelül 11,0 feletti pH-értéknél a T2 szál pálcikák kisebb oligomer egységekké válnak szét, az ülepedési állandójuk körülbelül 5,5 lesz. A szál kristályok feloldódnak 8,5 pH-értéken 4 M vizes nátriumklorid-oldatban, 50%-os vizes szacharóz-oldatban és 20%-os telített vizes kalciumklorid-oldatban. A kristályok 3 M-os vagy ennél töményebb karbamid-oldatban is oldódnak. Ha viszont a 3,5 M-os vagy ennél töményebb karbamid-oldattal a kezelés 2 napnál hosszabb ideig tart, a GC szálak denaturálódnak. Ultracentrifugálás 1 mg/ml GC szál készítményt állítottunk elő etanolamin pufferoldatban (ionerősség 0,147, pH = 10,1). Az oldatot 20 000 fordulat/perc sebességggel centrifugáltuk Beckman Spinco Model E ultracentrifugában, AN-D rotor alkalmazásával. A korrigálatlan ülepedési sebesség (S) értéke 37 svedberg. A GC szál pálcikák méretei A GC szál kristályokat felvettük etanolamin pufferoldatban (pH = 10,0) és megvizsgáltuk elektronmikroszkóp alatt. A GC szálak átlagos átmérője 83,4 ± 2,3Á. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 15
