174743. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új tripeptid-p-nitranilidek előállítására
3 174743 4 kívánt esetben szerves vagy szervetlen savval reagáltatva sót képezünk. Az I általános képletű vegyületeket a találmány értelmében előnyösen úgy állítjuk elő A=Pro esetén, hogy arginin-p-nitranilid-mono-hidrogén-bromi- 5 dot alkalmasan védett prolin-peptiddel acilezünk, s adott esetben az oldalláncfunkción levő védőcsoportot eltávolítjuk, majd szerves vagy szervetlen savval sót képezünk. Az olyan I általános képletű vegyületek esetén, 10 amelyekben A=NLe, a találmány szerint előnyösen úgy járunk el, hogy az arginin-p-nitranilid-mono-hidrogén-bromidhoz egymás után kapcsoljuk a rendre következő, alkalmasan védett aminosavakat, s adott esetben az oldallánc-funkcíón levő védőcsoportot eltávolítjuk, majd szerves vagy szervetlen savval sót képezünk. Az 1 általános képlet körében eső vegyületek tripszinnel végzett hidrolízisének jellemző kinetikai adatait, valamint az ismert, kereskedelmi forgalomban levő diagnosztikus szubsztrátok esetében talált értékeket az I. táblázatban foglaltuk össze. I. táblázat Az I általános képlet körébe eső vegyületek kinetikai jellemzői tripszinen z-----B-----A-----Arg NPN K x p mól V xx max nmól/perc enzim koncentráció nmól v XXX *''kat perc ~x K /K *Mcat M perc '1 -pmól Z-L-Lys-Pro-Arg-NPN 3,8 8,1 0,0033 2454 646 Z—D—Val—Pro—Arg —NPN 4,3 7,8 0,0033 2363 549 Z-L-Lys-Nle-Arg-NPN 3,8 6,0 0,0033 1818 479 Z—D—Phe—Pro—Arg—NPN 5,4 7,8 0,0033 2363 437 Z- L-Phe-Pro-Arg-NPN 5,7 7,5 0,0033 2272 398 kontroll vegyületek: Bz—L—Phe—Val—Arg—NPN 50,0 60,0 0,0160 3750 75 Bz-Arg-NPN 670,0 37,5 0,4710 90 0,135 xKm = Michaelis konstans Irodalom: XXVmax = maximális hidrolízis sebesség xxxKkat = Vmax/enzim koncentráció FRUTONJ.S.: Advances in Enzymology 33, 401 §Bz= benzoil-csoport. 45 MORIHARAjK.: Advances in Enzymology, 41, 179 (1974). 1. példa A kinetikai adatokból látható, hogy az I általános képletű vegyületek kötődési képessége - melyet az 1/Km, illetve a Kkat/KM hányados jelle- Benziloxikarbonil-L-fenilalanil-L-propil-L- mez - lényegesen meghaladja a kontroll vegyülete- -arginín-p-nitranilid-brómhídrát két. így a találmány szerinti eljárás legfőbb előnye, so előállítása hogy a felhasználásával előállított I általános képletű vegyületek segítségével egy nagyságrenddel ki- i. lépés: terjeszthető a meghatározható enzim mennyiségé- L-arginin-p-nitranilid-brómhidrát nek alsó határa. 55 A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. A példákban a hőmérsékleteket °C-ban adjuk meg. Az Rf értékeket szílikagél vékonyrétegkroma- go tográfíával határoztuk meg (Kieselgel G, Reanal, Budapest) az alábbi oldószerekben: 1 2 1. Etilacetát-piridin-ecetsav-víz (120 : 20 :6 :11) 2. Etilacetát-piridin-ecetsav-viz (60 : 20 :6 :11) 46,5 g (0,1 mól) Z-Arg-NPN• HCl-t [Y. Jacquot-Armand és M. Hill: FEBS Letters 11, 249 (1970)] feloldunk 250—300 ml 3—4 n jégecetes hidrogén-bromidban és 30—60 percen keresztül állni hagyjuk. Éteres hígítás után a kivált csapadékot szűrjük, éterrel mossuk, majd feloldjuk 300- —400 ml vízben, és az oldatot trietilaminnal lúgosítjuk 9-10 pH-ra. A kivált kristályokat szűrjük, vízzel és alkohollal mossuk, majd szárítjuk. A kapott termék súlya 32 g (82%). Op.: 223—225°. 65 Rf 0,25-0,30. [a]fj° = 50,7° (c=l, 80%-os ecetsav-2
