174650. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-piroglutamil-L-prolinamid előállítására
3 174650 4 Elemanalízis: számított: C49,4% H'70%, talált: C50,0 %, H l’,\ %, MMR-spektrum: A vizsgálathoz 60 MHz-es Perkin-Elmer készüléket használtunk. Az oldószer D20/TMS volt. 2,1 ppm multiplett 4H 2H ,2H 2.5 ppm multiplett 4H 2Hß 2H 3,7 ppm multiplett 2H 2H 4.5 ppm multiplett 2H H , H Az L-piroglutaminsav és az L-prolinamid amidcsoportjainak protonjai deutériummal cserélődnek ki, és ezért 5 = 4,65 ppm értéknél jelennek meg. A kapott rezonancia-értékeket a tirozintermelő hormon molekulájában található piroglutamil és prolinamid maradékok MMR-spektrumával végzett összehasonlítás alapján értelmeztük. [ lásd Fermandjian és munkatársai, FEBS Letters, 28, 156 (1972) és Boilot és munkatársai, C.R.Acad.Sci. Paris, Series C 276, 217-220(1973)]. A vegyület savas hidrolizátumának analízise a különböző alkotórészek helyes sztöchiometriáját jelzi: Glu/Pro/NHs = 1/1/1. Farmakológiái tulajdonságok Ismeretes, hogy az öregedés következtében a jól meghatározható betegségekben nem szenvedő idős embereknél is gyorsabban vagy lassabban bekövetkeznek olyan hanyatlási folyamatok, amelyek mint az általános állapot zavarai jelennek meg. Ezek a károsodások gyakoriak, és elsősorban három endokrin szinten jelennek meg. Ezek: az inzulin, pajzsmirigy és ivarmirigy szintje. Ismeretes például, hogy az inzulin-reagálás a táplálkozás következtében kialakult vagy mesterségesen kiváltott magas vércukorszintre eltérő mértékű és lényegesen kisebb az idős embereknél, mint az egészséges felnőtteknél (prediabetesz). Ugyanezt mondhatjuk el a pajzsmirigy jódrögzítő képességéről is [ lásd Handbook of Endocrinology, ed. Dillon, Lee and Febiger, Philadelphia, 1973 ]. Jelenleg nincs olyan terápia, amely lehetővé tenné ezeknek a károsodásoknak a hatékony leküzdését. Azt találtuk, hogy a találmány szerinti eljárással előállított új, (I) képletű L-piroglutamil-L-prolinamid alkalmas az öregedéssel összefüggő anyagcsere- vagy endokrin rendellenességek korrigálására. A vegyület például helyreállítja a szervezet alkalmazkodó képességét és bizonyos behatásokkal, mint például a mesterségesen kiváltott magas vércukorszinttel szembeni viselkedését, ugyanakkor azonban önmagában nem serkenti az inzulintermelést. Farmakológiai tesztek 1. Mesterségesen kiváltott magas vércukorszint vagy glükóz-tolerancia teszt A glükóz-tolerancia teszt abból áll, hogy patkányoknak orálisan 1 g/testsúly kg dózisban glükózt adunk be 1 ml vízben oldva, és megmérjük a plazmában a felszabadult inzulin mennyiségét 0, 15, 30, 60 és 120 perc elteltével. Ennél a tesztnél a normális reagálás egy háromszög idommal ábrázolható, ahol a mximális inzulintermelés körülbelül 15 percnél jelentkezik. Tíz darab 12 hónapos patkányt egy hétig fiziológiás sóoldattal kezeltünk. Az utolsó nap feleslegben N 17,28%, H2 0 7,40%; N 17,10%, H2 0 6,74%. vett glükózt adtunk be az állatoknak a fenti tesztnek megfelelően. Az inzulinreagálás gyenge volt. Ugyanezeket az állatokat ezután orálisan 5 napig kezeltük 40 mg/kg dózisú, 1 ml vízben oldott L-piroglutamil-prolinamiddal, majd ismét elvégeztük a glükóz-tolerancia tesztet. A kapott eredményeket az I. táblázatban mutatjuk be. I. Táblázat Inzulinszint /LiU/ml Mérés idő-Kezelés Szélső Kezelés Szélső pontja, «lőtt értékek* után értékek* 0 11 10,5-12 10,1 9,1-10,9 15 17 15,5-19 34 33,8-35 30 10,3 9,5-11 23 20,5-24 60 9 8,2-10,1 5 3,4-6,5 120 4,2 2,8- 5,7 7,1 6-8,6 A háromszög területe 1100 978-1248 1541,2 1369,5-1697,25 *A szélső értékek az ugyanannál a mintánál mért szélső értékeket jelentik (a szórások az alkalmazott mérési módszertől erednek). Nem az állatok közötti eltérésektől származnak, mivel az analizált szérummintát a tíz vizsgált állattól vett szérumok összekeverésével kaptuk. Összehasonlításul fiatal, L-piroglutamil-L-prolinamidos kezelést nem kapott állatok egy csoportján is elvégeztük a glükóz-tolerancia tesztet. Az eredményeket a II. táblázatban tüntetjük fel. II. Táblázat Mérés időpontja, perc Inzulinszint U/ml Szélső értékek 0. 8,5 7,5-9,5 15. 21 20-22,5 30. 31 29-33 160. 15 15 Megjegyzendő, hogy a glükózfelesleg beadása előtti inzulin alapérték (0 perc elteltekor) nem módosul a kezelés hatására. Ez azt bizonyítja, hogy maga a vegyület nem inzulintermelő anyag. Ugyanezt a tesztet kutyákon is elvégeztük. 5 mg/kg dózis beadása esetén azoknál a kutyáknál tapasztaltuk a legnagyobb mértékű reagálást az L-piroglutamil-L-prolinamidra, amelyeknek a legnagyobb alap cukor- és inzulinszintjük volt. A kis inzulin-, de normális cukorszintű állatok gyakorlatilag nem reagáltak erre a kezelésre. Kisebb dózisok (1 mg/kg) alkalmazásakor a kezelés gyakorlatilag nem befolyásolta a glükóz- és inzulin-értékeket, egyetlen terhes 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
