174649. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új kalcitonin-származék előállítására
19 174649 20 6,0-ra állítjuk be, majd 2,2 g BOC-Leu-His-Lys (DIP) -Leu-OH-t, 386 mg 1-hidroxibenzotriazolt és 0,52 ml N-etil-N’ -dimetilaminopropil- karbodiimidet adunk hozzá, majd további 1-hidroxibenzotriazol hozzáadásával a pH-t 5,5-6-ra állítjuk be, és éjjelen át szobahőmérsékleten keveijük. A reakciókeverékhez etilacetátot és dietilétert adunk, és a kivált csapadékot szűréssel elválasztjuk, kétszer dimetilformamiddal, etilacetáttal, metanollal és dietiléterrel kezeljük. 6,0 g cim szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 162-166° (bomlik). Vékonyrétegkromatografálással egyetlen foltot kapunk. Rj? = 0,38 (3. sz. oldószerrendszerrel); R* = 0,20. [ a]2® = 18,20° (c=l, dimetilformamid). Aminosavelemzés: Lys 0,97(1), His 0,96(1), NH3 2,34, Arg 1,00(1), Asp 1,02(1), Thr 2,43(3), Glu 1,09(1), Pro 1,96(2), Gly 2,00(2), Ala 0,93(1) Val 1,10(1), Leu 1,94(2), Tyr 0,90(1). 21 ) BOC-Glu(OBzl)-Leu-His-Lys (DIP)-Leu-Glu-Thr (Bzl) -Tyr(Bzl)-Pro-Arg (Tos)-Thr (Bzl)-Asp (OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl>Pro-NH2 A 20) pont szerint előállított 6,0 g [ 16—32 ] heptapeptid-amidot -5°-on hozzáadjuk 25 ml trifluorecetsavhoz, 40 percig kevetjük majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, és vákuumban nátriumhidroxidon szárítjuk, majd 13 ml dimetilformamidot adunk hozzá, és a pH-t— 5°-on trietilamin hozzáadásával 6,5-re állítjuk be. Ezután 270 ml 1-hidroxibenzotriazolt és 1,74 g BOC-Glu(OBzl)-OSU-t adunk hozzá, a pH-t N-metilmorfolinnal 7-re állítjuk be, és szobahőmérsékleten 2 napig keveijük, majd további 870 mg BOC-Glu (OBzl}-OSU-t adunk hozzá, a pH-t 7-re beállítjuk, és további 2 napig keveijük. A reakciókeverékhez etilacetátot, metanolt és dietilétert adunk, és a kivált sárga terméket szűréssel elválasztjuk. Dimetilformamid, dietiléter és etilacetát hozzáadására további csapadékot kapunk. A csapadékot forró metanolban aktív szénnel derítjük, és dietiléter hozzáadásával a terméket leválasztjuk. Metanol és dietiléter elegyéből átkristályosítva 5,13 g (87,8 %) cim szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 184-192°. Rj =0,56. 22) BOC-Gln-GluiOBzl)-Leu-His-Lys(DIP) -Leu-Gln-Thr(Bzi) -Tyr(Bzl) -Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl) -Asp(OBzl)Val -Gly- Ala-GlyThr(Bzl)-Pro-NH2 A 21) pont szerint előállított 4,96 g [15*32] oktadekapeptidamidot -5°-on hozzáadjuk 35 ml trifluorecetsavhoz, 40 percig keveijük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, majd vákuumban nátriumhidroxidon szárítjuk. 15 ml dimetilformamidot adunk hozzá, és a pH-t -5°-on trietilamin hozzáadásával 7,0-ra állítjuk be. 70 mg l-hidroxibenzotriazol és 940 mg BOC-Gln-ONP hozzáadása után a pH-t N-metílmorfolinnal újra 7,0-ra állítjuk be, éjjelen át szobahőmérsékleten keveijük, majd további 320 mg BOC-Gln-ONP-t adunk hozzá, és éjjelen át ismét keverjük. Ezután a reakciókeverékhez nagy mennyiségű vizet adunk. A keletkezett csapadékot szűrőn elválasztjuk, kétszer metanol és dietiléter elegyéből, és egyszer dimetilformamid, metanol és dietiléter elegyéből átkristályosítjuk, mire 4,03 g (77,8 %) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 217-227° (bomlik). A 3. oldószerrendszerrel vékonyrétegkromatografálva egyetlen foltot kapunk. Aminosavelemzés: Lys 0,93(1), His 0,92(1) Are 0,85(1), Asp 1,04(1), Thr 2,43(3), Glu 3,15(3), Pro 1,92(2), Gly 2,0(2), Ala 0,84(1), Val 1,10(1), Leu 2,00(2), Tyr 0,74(1). 23) BOC-Leu-Ser(Bzl)-OH 50 ml víz és 10 ml dioxán elegyével készült 6,4 g nátriumkarbonát-tartalmú oldatban feloldunk 11,7 g H-Ser(Bzl)-OH4, és az oldathoz hozzáadjuk 16,4 g BOC-Leu-OSU 20 ml 3:1 arányú dioxán-víz eleggyel készült oldatát, majd szobahőmérsékleten éjjelen át keveijük. A reakciókeverék pH-ját 6 n sósavval 7-re állítjuk be, majd az oldószereket ledesztilláljuk. A maradékot etilacetáttal és n-sósavval összekeveijük, az etilacetátos réteget elválasztjuk, majd n sósavval és vízzel mossuk, magnéziumszulfáton szárítjuk, vákuumban bepároljuk, és a maradékot etilacetát és n-hexán elegyéből átkristályosítjuk. Etilacetát és n-hexán elegyéből ismét átkristályosítva 18,5 g (92,5 %) BOC-Leu-Ser (Bzl)-OH-t kapunk. Olvadáspontja 82-85,5°. Vékonyrétegkromatografálással egyetlen foltot kapunk. R^ = 0,44 (l.sz. oldószerrendszerrel). [a]2j} = +6,9 ° (c*2, dimetilformamid) 24) BOC-Lys(DIP)-Leu-Ser(Bzl)-OH 18,0 g BOC-Leu-Ser(Bzl)-OH-hoz— 5°-on hozzáadunk 90 ml trifluorecetsavat, 40 percig keveijük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, hogy a termék kiváljon. A csapadékot nátriumhidroxidon vákuumban szárítjuk, majd 40 ml piridinben feloldjuk, —5°-on 1 g 1-hidroxibenzotriazolt és 21,0 g BOC-Lys(DIP)-OSU-t adunk hozzá, és szobahőmérsékleten 5 napig keveijük. A reakciókeverékhez nagy mennyiségű vizet adunk, és a keletkezett csapadékot szűréssel elválasztjuk, szárítjuk, és kloroformban oldjuk, majd egymásután n nátriumkarbonát-oldattal, n sósavval és vízzel mossuk, vízmentes magnéziumszulfáton szárítjuk, és bepároljuk. A maradékként kapott kocsonyás anyagot kovasavgél-oszlopon kromatografáljuk, és 5:2:5 arányú kloroform-etanol-etilacetát eleggyel eluálunk. Az eluált frakciókat kovasavgélen vékonyrétegkromatografálva és a fenti kifejlesztő-elegyet használva vizsgáljuk. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítve, vákuumban bepároljuk. A maradékot kloroform és dietiléter elegyéből átkristályosítva, 12 g (40,3%) BOC-Lys(DIP)-Leu-Ser (Bzl)-OH-t kapunk. Olvadáspontja 178,5-183,0 0 (bomlik). Rf = 0,53. [ a ]2® = -7,1° (c=l, dimetilformamid). A lentivel azonos oszlopon további kromatografálást végezve metanol használatával 9 g (30,2 %) cím szerinti vegyületet kapunk. 25) BOC-Lys(DIP)-Leu -Ser(Bzl)-Gln-Glu(OBzl)-. -Leu -His-Ly s(DIP)-Leu-Gln -Thr(Bzl)-iyr(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly -Thr( Bzl) -Pro -NH 2 A 22) pont szerint előállított 3,81 g [ 14—32 ] nonadekapeptidamidhoz —5°-on 35 ml trifluorecetsavat adunk. 40 percig keveijük. majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, es vákuumban nátriumhidroxidon szárítjuk, majd 15 ml dimetilformamidot adunk hozzá, a kapott oldat pH-ját trietilaminnal 5-re állítjuk be, —5°-on hozzáadunk 220 mg 1-hidroxibenzotriazolt, 1,10 g BOC-Lys(DIP>Leu-Ser(Bzl)-OH-t és 0,3 ml N-etil-N’ -dimetilaminopropil- karbodiimidet, és 1 óra hosszat —5°-on, majd éjjelen át szobahőmérsékleten keveijük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
