174649. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új kalcitonin-származék előállítására
21 174649 22 Ezután további 34 mg 1-hidroxibenzotriazolt, 185 mg BOC-Lys(DIP)-Leu-Ser (Bzl)-OH-t és 0,046 ml N-etil - -N’ -dimetilarninopropil-karbodiimidet adunk hozzá, és 7 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, majd ugyanilyen mennyiségű 1-hidroxibenzotriazolt, BOC-Lys (DIP)-Leu-Ser (Bzl)-OH-t és N-etil-N’ -dimetilaminpropil-karbodiimidet adunk hozzá, és éjjelen át keverjük. A reakció befejeződése után a reakciókeverékhez nagy mennyiségű vizet adunk, a kivált csapadékot kétszer metanol és dietiléter elegyével, majd forró etanollal kezeljük, és ötször centrifugáljuk. 2,26 g (50,1 %) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 228° fölött van (bomlik). Rj? = 0,54. BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-OH [1-10.] dekapeptid 26) BOC-Leu-Gly-OBzl 34 g N-etil-N’-dimetilaminopropil-karbodiimid 50 ml diklórmetánnal készült oldatát —5° -on 1 óra alatt keverés közben hozzácsepegtetjük 46,2 g BOC-Leu-OH-nak, 1 g 1-hidroxibenzotriazolnak és 74 g H-Gly-OBzl. Tos-OH-nak 100 ml dimetilformamiddal és 200 ml diklórmetánnal készült szuszpenziójához. Ezután az oldatot éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük, majd a diklórmetánt vákuumban ledesztilláljuk. A dimetilformamidos réteghez vizet adunk, és 1 liter etilacetáttal, majd másodszor 500mletilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos kivonatot egymásután n sósavval, vízzel, 5%-os vizes nétriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk. Vákuumban bepárolva olajos termékként 82 g BOC-Leu-Gly-OBzl-t kapunk. Rj- = 0,68. 27) BOC-Val-Leu-Gly-OBzl 70 ml trifluorecetsavhoz —5°-on hozzáadunk 76 g BOC-Leu-Gly-OBzl-t, 30 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot vákuumban nátriumhidroxid fölött szárítjuk, majd hozzáadunk 200 ml dimetilformamidot, és a pH-t -5"-on mintegy 50 ml trietilamin hozzáadásával 6,5-re állítjuk be. A reakciókeverékhez 19 g BOC-Val-OSU-t és 2 g 1-hidroxibenzotriazolt adunk, a pH-t N-metilmorfolinnal 6-ra állítjuk be, és szobahőmérsékleten 4 napig keverjük. A keverés alatt a reakciókeverék pH-ját N-metilmorfolin hozzáadásával állandóan 6-on tartjuk. Ezután nagy mennyiségű vizet adunk hozzá, és etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos kivonathoz 1 ml N,N-dimetilamino-l,3-propándiamint adunk, 30 percig keverjük, majd egymás után vízzel, n sósavval, 5 %-os vizes nátriumhidrogénkarbonát- oldattal és vízzel mossuk, és vízmentes magnéziumszulfáton szárítjuk. Az etilacetát ledesztillálása után a maradékot n-hexánból átkristályosítva, 90 g (94 %) BOC-Val-Leu- Gly-OBzl-t kapunk. Olvadáspontja 119-121°. 28) BOC-Cys (Mbzl)-Val-Leu-Gly-OBzl 47,8 g BOC-Val-Leu-Gly-OBzl-hez—5°-on hozzáadunk 150 ml trifluorecetsavat, 20 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz benzolt adunk, és azeotrop desztillációval a benzolt eltávolítjuk. A maradékot vákuumban nátriumhidroxidon szárítjuk, majd 200 ml dimetilformamidban feloldjuk, az oldat pH-ját trietilaminnal 7-re állítjuk be, hozzáadunk 5,7 g BOC-Cys (Mbzl)-OSU-t és 3 g 1-hidroxibenzotriazolt, és 2 napig keverjük. A reakció befejeződése után 0,5 ml N,N-dimetilamino-l,3-propándiamint adunk hozzá és 1 óra hosszat keverjük. A reakciókeverékhez fölös mennyiségű vizet adunk, és etilacetattal extraháljuk. Az etilacetátos kivonatot n sósavval, vízzel, 5 %-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, 5 %-os nátriumkarbonát-oldattal és végül vízzel mossuk, majd vízmentes magnéziumszulfáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetát, benzol és n-hexán elegyéből átkristályosítva, 53 g (75,7 %) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 141-143°. R.6 = 0,36. [ a j2' = —43,8° (c=l,7, etanol). 29) BOC-Thr(Bzl) -Cys (Mbzl)-Val-Leu-Gly-OBzl 52 g BOC-Cys (Mbzl)-Val-Leu-Gly-OBzl-hez-5°-on 150 ml trifluorecetsavat adunk, 30 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz n-hexánt tartalmazó dietilétert adunk, és porrá eldörzsöljük, majd vákuumban nátriumhidroxidon szárítjuk. 200 ml dimetilformamidot adunk hozzá, az oldat pH-ját trietilaminnal 6,5-re állítjuk be, majd 2 g 1-hidroxibenzotriazolt és 39 g BOC-Thr (Bzl)-OSU-t adunk hozzá, az oldat pH-ját N-metilmorfolinnal 6-ra állítjuk be, és szobahőmérsékleten 2 napig keverjük. A reakciókeverékhez ezután 0,5 n sósavat adunk, a kivált csapadékot szűréssel elválasztjuk, vízzel mossuk, és 90 %-os etanol és etilacetát elegyéből átkristályosítva 55 g (83,4 %) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 190—194° (bomlik). Rf* = 0,46. [a]2p5 = —14,5 ° (c-1,5,dimetilformamid). 30) BOC-Ser(Bzl)-Thr(Bzl)-Cys(Mbzl)-Val-Leu-Gly-OBzl 53,5 g BOC-Thr(Bzl)- Cys(Mbzl)-Val- Leu-Gly- OBzl-hez —5 °-on 250 ml trifluorecetsavat adunk, 30 percig keverjük, és vákuumban bepároljuk. A termék leválasztására a maradékhoz 1:1 arányú dietiléter és n-hexán elegyet adunk, majd vákuumban nátriumhidroxidon szárítjuk. 200 ml dimetilformamidot adunk hozzá, a pH-t 6,5-re állítjuk be, majd 2 g 1-hidroxibenzotriazolt és 28,2 g BOC-Ser(Bzl)-OSU-t adunk hozzá, a pH-t N-metilmorfolinnal 6-ra állítjuk be, és 2 napig keverjük. A reakciókeverékhez 700 ml 0,5 n sósavat adunk, és a kivált csapadékot szűréssel elválasztjuk, vízzel mossuk, 800 ml etanol hozzáadásával újra leválasztjuk, majd dietiléterrel mossuk, és szárítjuk, mire 58 g nyers terméket kapunk. Etanol és etilacetát elegyéből átkristályositva 49,0 g (76,5 %) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 234-236° (bomlik). Rf' = 0,54. [ a ]2 ® i —12,7 0 (c*l, dimetilformamid). 31) Cbz-Asn-Leu-OBzl 150 ml dimetilformamidban feloldunk 26,6 g Cbz-Asn-OH-t és 43,3 g H-Leu-OBzl • Tos-OH-t. Az oldathoz 2 g 1-hidroxibenzotriazolt adunk, és -10°-on 30 perc alatt hozzácsepegtetünk 16,3 g N-etil-N’-dimetilaminopropil-karbodiimidet, majd éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután a reakciókeverékhez vizet adunk, és a kivált csapadékot etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos kivonatot egymás után n sósavval, vízzel, 5 7«-os nátriumkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, vízmentes magnéziumszulfáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. Etilacetát és n-hexán elegyéből átkristályosítva 40 g (80 7c) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 154-155,5°. 32) BOC-Ser(Bzl)-Asn-Leu-OH 400 ml metanol, 50 ml dimetilformamid, 50 ml ecetsav és 100 ml víz elegy ében melegen feloldunk 30 g Cbz-Asn-Leu-OBzl-t, és az oldatot katalitikus 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
