174649. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új kalcitonin-származék előállítására
23 174649 24 mennyiségű 5 % palládiumtartalmú szén jelenlétében hidrogénezzük. A reakció befejeződése után a katalizátort szűréssel eltávolítjuk, és a szüredéket vákuumban 150 ml-re bepároljuk. Az oldat pH-ját trietilaminnal 7-re állítjuk be, majd hozzáadunk 1 g 1-hidroxibenzotriazolt és 30 g BOC-Ser(Bzl)-OSU-t, és 2 napig szobahőmérsékleten keverjük. A termék leválasztására a reakciókeverékhez vizet adunk, és etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos kivonatot n sósavval és vízzel mossuk, vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetát és n-hexán elegyéből átkristályosítva, 30,8 g (92 7c) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 176-178°. [ a]2® = —7,3° (c=0,9, dimetilformamid) 33) BOC-Ser (Bzl)-Asn-Leu-Ser (Bzl)-Thr (Bzl)-Cys (Mbzl )-Val-Leu-Gly-OBzl 10 g BOC-Ser (Bzl)-Thr(Bzl)-Cys (Mbzl)Val-Leu-Gly-OBzl-hez —5°-on hozzáadunk 50ml trifluorecetsavat, 30 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, mire a termék kiválik. Vákuumban nátriumhidroxidon szárítjuk. Hozzáadunk 30 ml dimetilformamidot, a pH-t trietilaminnal 5,5-re állítjuk be, majd 1,3 g 1-hidroxibenzotriazolt, 5,5 g BOC-Ser(Bzl)-Asn-Leu-OH-t és —5°-on 1,92 ml N-etil-N’-dimetilaminopropil- karbodiimidet adunk hozzá. A reakciókeveréket 1 óra hosszat keverjük, és éjjelen át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az így kialakult kocsonyás anyaghoz 20 ml dimetilformamidot adunk, és a kapott szuszpenziót 200 ml 0,5 n sósavhoz adjuk hozzá. A kivált fehér anyagot szűréssel elválasztjuk, egymás után vízzel, etanollal és dietiléterrel mossuk, majd szárítjuk. A kapott nyers termékhez 100 ml etanolt adunk, és melegítjük. Lehűlés után a terméket szárítjuk. 12,5 g (85 %) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 246-252° (bomlik). Rf2 = 0.68. [ a ]2^ =-18,96° (c=0,62, dimetilformamidban). 34) BOC-Cys (Mbzl)-Ser (Bzl)-Asn-Leu-Ser (Bzl)-Thr (Bzl)-Cys (Mbzl)-Val-Leu-Gly-OBzl 10.0 g BOC-Ser (Bzl)-Asn-Leu-Ser (Bzl)-Thr (Bzl)-Cys (Mbzl)-Val-Leu-Gly-OBzl-hez -5°-on hozzáadunk 50 ml trifluorecetsavat. 30 percig keverjük, és vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, mire a termék kiválik. Vákuumban nátriumhidroxidon szárítjuk, majd hozzáadjuk 30 ml dimetilformamid és 15 ml hexametilfoszfortriamid keverékéhez és -5°-on trietilamin hozzáadásával a pH-t 6,5-re állítjuk be. A reakciókeverékhez 1 g 1-hidroxibenzo - triazolt és 4,5 g BOC-Cys (Mbzl)-OSU-t adunk, és 2 napig szobahőmérsékleten reagáltatjuk, miközben N-metilmorfolinnal a pH-t 6-on tartjuk. A reakció befejeződése után a reakciókeverékhez etilacetátot adunk, és a kivált csapadékot szűréssel elválasztjuk. A csapadékot etanol jelenlétében melegítve 10.7 g (93 7') cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 247 253° (bomlik). R2 =0,55. [a]2® = -17,01 ° (c= 0,53, dimetilformamid). D 35) BOC-Cys-Ser-Asn-Leu -Ser Thr Tyx-Val-Leu- Gly-OH 300 ml-es Erlenmeyer lombikba 1,10 g BOC-Cys(MBzl)-Ser (Bzl)-Asn-Leu-Ser (Bzl)-Thr (Bzl)-Cys (MBzl)-Val-Leu-Gly-OBzl-t helyezünk, és szilárd széndioxid és metanol keverékével hűtve vízmentes cseppfolyós ammóniát adunk hozzá. Ezután a szilárd széndioxid-fürdőt eltávolítjuk, és vízmentes nitrogéngáz átbuborékoltatása közben a reakciókeverékbe a kék szín eltűnéséig -20 másodpercig - fémnátriumot adunk. A fölös nátriumot néhány csepp ecetsav hozzáadásával elbontjuk, és a cseppfolyós ammóniát 2 óra alatt elszívjuk. Ezután a terméket tömény kénsav fölött vákuumban szárítjuk, majd 200 ml dimetilformamid és 400 ml 0,5 %-os ecetsav elegyében feloldjuk. Az oldat pH-ját vizes ammóniával 6,8-ra állítjuk be, és széndioxidmentes levegőt buborékoltatunk át rajta addig, amíg a nitroprusszidnátrium reagenssel végzett reakció negatívvá nem válik. Ekkor a reakciókeverék pH-ját ecetsawal 4,0-ra állítjuk be, és vákuumban 150 ml-re bepároljuk. A maradékhoz 500 ml etilacetátot adunk, és az üvegfalnak üvegpálcával való dörzsölésére az anyag kristályossá válik, majd további 500 ml etilacetátot adunk hozzá, és hűtőszekrényben tároljuk. A szerves oldószert dekantálással eltávolítjuk, majd etilacetátot adunk hozzá, mire a szervetlen sót tartalmazó 3,76 g por kicsapódik. A port kevés 1:1 arányú metanol-víz elegyben feloldjuk, Sephadex CM gyantával töltött 4,4 cm átmérőjű 60 cm hosszú oszlopra visszük fel, és 1:1 arányú metanol-víz eleggyel kromatografáljuk. Az eluátumot 10 ml-es frakciókként szedjük, és a 230 mAt-nál abszorpciós maximumot mutató 36.-46. frakciókat egyesítjük. A metanolt vákuumban ledesztilláljuk, és a maradékot liofilizálva 210 mg poralakú terméket kapunk. Vékony rétegkromatografálással vizsgálva egyetlen foltot kapunk (kovasavgélen 2. és 8. oldószerrendszerekkel). Aminosavelemzés: Asp 1,02(1), Thr 0,90(1), Ser 1,72(2), Gly 1,00(1), Cys 1,52(2), Val 1,09(1), Leu 2,00(2). 2. példa H -C ÿs-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cÿ s-Val-Leu-Gly-Lys--Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg--Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Pro-NH2'rH3COOH 3 ml trifluorecetsav és 1 ml 4 n sósav-dioxán elegyben —5° -on feloldunk 732 mg BOC-Lys(ClCbz) -Leu-Ser(Bzl)-Gln-Glu (OBzl>Leu-His-Lys (ClCbz)-Leu-Gln-Thr (Bzl)-Tyr (Bzl)-Pro- Arg (Tos)-Thr (Bzl> -Asp (OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro -NH2-t, 35 percig szobahőmérsékleten keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz etilacetátot adunk, mire a termék kiválik. A csapadékot nátriumhidroxid fölött szárítjuk, majd 3 ml dimetilformamidban oldjuk, és az oldat pH-ját -5°-on N- metilmorfolinnal 5,54í-ra állítjuk be. Ehhez az oldathoz hozzáadunk 3 mg l-hidroxibenzotriazolt,100 míg diciklohexilkarbodiimidet és az 1. példa szerint előállított 500 mg BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys -Val-Leu-Gly-OH-t, és 2 óra hosszat 0°-on, majd éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. A reakció befejeződése után a reakciókeverékhez vizet adunk, és a kivált csapadékot szűréssel elválasztjuk, vizzel és etilacetáttal alaposan mossuk. Vákuumban szárítva 700 mg nyers terméket kapunk. A nyers terméket 35 ml hidrogénfluoriddal 1 óra hosszat 1,5 g fenol és 4,0 ml anizol jelenlétében 0°-on reagáltatjuk, majd a hidrogénfluoridot ledesztilláljuk. A maradékot háromszor 30 ml etilacetáttal mossuk, szárítjuk, majd 200 ml 0,5 mólos ecetsavban feloldjuk. Az oldatot 2 cm átmérőjű 20 cm hosszú acetát-alakban levő Dowex 1x2 gyantával töltött oszlopra töltjük, és az eluátumot liofilizálva 451 mg 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 12
