174649. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új kalcitonin-származék előállítására
3 174649 4 izopropoxi-karbonil- vagy 2-p-difenilizopropoxikarbonilcsoporttal védhetjük. Az aminocsoportok úgy is megvédhetek, hogy 1,3-diketonnal, például benzoilacetonnal, acetilacetonnal vagy dimedonnal reagáltatva enamint képezünk. A karboxilcsoportot amidképzéssel, hidrazidképzéssel vagy észterezéssel védhetjük. Az amidcsoport 3.4- dimetoxibenzil- vagy bisz-(p-metoxifenil) -metilcsoport-tal lehet szubsztituálva. A hidrazidcsoport benziloxi- karbonil-, triklóretiloxikarbonil-, trifluoracetil-, terc-butoxikarbonil-, tritil-, vagy 2-p-difenil-izopropoxikarbonilcsoporttal lehet szubsztituálva. Az észter-csoport alkanollal, például metanollal, etanollal, például benzilalkohollal, p-brómbenzilalkohollal, p-klórbenzilalkohollal, p-metoxi-benzilalkohollal, p-nitrobenzilalkohollal, 2,4,6-trimetilbenzilalkohollal, benz-benzilalkoh óllal, benzoilmetilalkohollal, p-brómbenzoilmetilalkohollal, vagy p-klórbenzoilmetilalkohollal, fenollal, például 2,4,6-triklórfenollal, pentaklórfenollal, p-nitrofenollal, 2,4-dinitrofenollal, p-cianofenollal vagy p-metánszulfonilfenollal vagy egy tiofenollal, például tiofenollal, tiokrezollal vagy p-nitrotiofenollal alkotott csoport lehet. A szerűiben, treoninban és tirozinban a hidroxilcsoport kívánt esetben észterezéssel vagy éterezéssel védhető. Észterezéssel védett csoport például a kevés szénatomos alkanoilcsoport, amilyen az acetilcsoport vagy aroilcsoport, amilyen a benzoilcsoport vagy karbonilcsoport, például benziloxikarbonil- vagy etiloxikarbonilcsoport lehet. Éterezéssel védett csoport például benzil-, tetrahidropiranil- vagy terc-butilcsoport lehet. A hidroxilcsoport védelmét 2,2,2-trifluoro-l-terc-butil- oxikarbonil-aminoetil- vagy 2,2,2-trifluor-l-benziloxi- karbonil-aminoetilcsoporttal lehet elérni. Ezeket a hidroxil-csoportokat azonban nem mindig szükséges védeni. A ciszteinben a merkaptocsoportot például acilezéssel vagy alkilezéssel védhetjük. Az acilező védőcsoport például acetil-, etoxikarbonil-, benzoil-, etilkarbamoil-, benziloxikárbonil- vagy szubsztituált benziloxikarbonilcsoport lehet. Az alkilező védőcsoport például terc-butil-, acetamidometil-, benziltiometilvagy benzilcsoport vagy arilmetilcsoport, például 3.4- dimetil-benzil-, p-metoxi-benzil-, difenilmetil-, dimetoxibenzhidril- vagy tritilcsoport, fenilciklohexilvagy tienil -2-ciklohexilcsoport lehet. Az argininben a guanidinocsoport aminocsoportját nitro-, tozil- vagy benziloxikarbonil-csoporttal lehet védeni, azonban a guanidinocsoport védelme nem szükségszerű. A hisztidinben az iminocsoportot benzil-, tritil-, benziloxikarbonil-. tozil-, adamantiloxikarbonil-, 2,2,2-trifluor-l -terc-butiloxi-karbonil-aminoetil- vagy 2,2,2- trifluor-l -benziloxikarbonil- aminoetilcsoporttal védhetjük, de ezt az iminocsoportot sem kell mindig védeni. A kiindulási vagy közbenső peptideket úgy állíthatjuk elő, hogy aminosavakat vagy két-négy aminosavból álló peptideket az 1 képlet szerinti aminosav-sorrendben kondenzálunk, és a két L-cisztilcsoportot tartalmzó peptidet úgy állítjuk elő, hogy a peptid szintézise folyamán diszulfid kötést alakítunk ki. Például védett a-aminocsoportot és aktíváit karboxilvégcsoportot tartalmazó aminosavat szabad a-aminocsoportot és védett karboxil-végcsoportot tartalmazó aminosawal vagy peptiddel reagálhatunk. Másrészt aktivált a-aminocsoportot és védett karboxil-végcsoportot tartalmazó aminosavat vagy peptidet szabad Z karboxil-végcsoportot és védett a-aminocsoportot tartalmazó aminosawal vagy peptiddel reagáltatunk. A karboxilcsoportot például savaziddal, savanhidriddel, savimidazoiiddal vagy aktív észterrel aktiválhatjuk cianometilészterré, tiofenilészterré, p-nitrotiofenilészterré, p-metánszulfonilfenilészterré, tiodilészterre, p-nitrofenilészterré, 2,4-dinitrofenilészterré, 2,4,5-triklórfenilészterré, 2,4,6-triklórfenilészterréí pentaklórfenilészterré, N- hidroxiftálimidoészterré, B-hidroxipiperidinész'srré vagy N-hidroxipiperidinészterré vagy karbodiimiddé, N Jílcarbonil-diimidazollá vagy izoxazoliumsóvá, például Woodward-féle reagenssé alakítással. A karboxilcsoportot szokásos módon, például savaziddal, savanhidriddel, aktív észterrel vagy karbodiimiddel aktiválhatjuk. Előnyös kondenzációs reakció a Wünsch-módszer az azidos, az aktív észteres vagy Geiger-féle módszer. A kondenzációs reakcióban a racemizálódást gondosan el kell kerülni. A találmány szerinti új peptid előállítási eljárásának különböző szakaszaiban a diszulfidkötés felhasadása előfordulhat, ezért ezt a kötést előnyösen a szintézis utolsó lépésében alakítjuk ki. Ennek megfelelően a diszulfid kapcsolást előnyösen úgy hajtjuk végre, hogy ciszteinilcsoportot nem tartalmazó peptidet, például védett trikozapeptidamidot (10 -32. szekvencia) vagy védett dokoza-peptidamidot (11-32. szekvencia) egy másik, ciszteinilcsoportot tartalmazó peptiddel, például védett nonapeptiddel (1 -9. szekvencia) vagy védett dekapeptiddel (1 -10. szekvencia) reagáltatunk. A diszulfidkötés kialakítását úgy hajtjuk végre, hogy a szabad merkaptocsoportot tartalmazó védett peptidet jégecetben jóddal vagy szerves oldószerben dijódetánnal vagy 6,5 pH-jú vízben oxigénnel vagy hidrogénperoxiddal vagy levegővel oxidáljuk. Védett merkaptocsoportot, például tritil- vagy acetamidocsoporttal védett merkaptocsoportot úgy kapcsolhatunk, hogy egyidejűleg a védőcsoportot metanolban jóddal reagáltatva eltávolítjuk. Abban az esetben, ha a találmány szerinti új polipeptid előállítását a Merrifield-féle szilárd fázisú péptidszintézissel végezzük, akkor a szerinben, treoninban és tirozinban levő hidroxilcsoportot például benzilcsoporttal védhetjük, a cisztein merkaptocsoportját acetoamidometil-, benzil-, 3,4-dimetilbenzilvagy p-metoxibenzilcsoporttal védhetjük, a hisztidin iminocsoportját például 1-benziloxikarbonilamino-2,2,2 -trifluormetil- csoporttal, az arginin guanidinocsoportját nitrocsoporttal és a glutaminsav oldalláncát benzilésztercsoporttal védhetjük. Az a-aminocsoport védőcsoportja például terc-butiloxikarbonil-, o-klórbenziloxikarbonil- vagy o-brómbenziloxikarbonil-csoport lehet. A védett peptidet a hordozó gyantáról eltávolítjuk, és a védőcsoportot vízmentes hidrogénfluoriddal hasítjuk le. Az összes védőcsoport eltávolitását egyetlen lépesben, trifluorecetsawal végzett hidrolízissel akkor hajtjuk végre, ha az aminocsoport védelmére terc-butoxikarbonil-csoportot, az oldalláncbeli karbonilcsoport védelmére terc-butilésztert, a szerin, a treonin és tirozin hidroxil-csoportjának védelmére terc-butilésztert és a hisztidin iminocsoportjának védelmére 2,2,2- trifluor-l -terc-butoxikarbonil-aminoetil-csoportot használunk. Ha trifluorecetsawal eltávolítható védőcsoportot használva állítunk elő védett dotriakontapeptidet, úgy a merkaptocsoportot előnyösen acet-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
