174606. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tripeptidek előállítására
9 174606 10 megfelelő amiddá vagy észterré. A terminális csoportként észter-csoportot tartalmazó tripeptidekből kívánt esetben ismert módon terminális amid - -csoportot tartalmazó tripeptideket alakíthatunk ki. A tripeptideket legegyszerűbben úgy távolíthatjuk el a gyantáról, hogy a gyantát egy megfelelő alkohollal átészterezzük. Az eljárás előnye, hogy a tripeptidet észter formájában kapjuk, amelyből kívánt esetben egyszerűen kialakíthatjuk az amid-vegyületet. Ezeket a reakciókat a következő egyenletekkel szemléltetjük: L-Kic-L-His-L-Pip-„P”+ROH-* -*■ L-Kic-L-His-L-Pip-OR L—Kic—L—His-L—Pip—OR+NH3 -*-*■ L-Kic-L—His-L-Kp-NH2 A fenti reakcióegyenletekben további védőcsoportokat nem tüntettünk fel nyilvánvaló azonban, hogy a Kic nitrogénatomjaira, valamint a His imidazol-csoportjára kívánt esetben védőcsoportokat vihetünk fel. E védőcsoportokat a szintézis egy megfelelő szakaszában távolíthatjuk el. A szilárd fázisú szintézis alkalmazásával N3im-szubsztituált-His-csoportot tartalmazó tripeptideket is előállíthatunk, a szubsztituenst a szintézis előtt vihetjük be a megfelelő aminosav-komponensbe, vagy a szintézis során alakíthatjuk ki. A védőcsoportok felvitelét és lehasítását önmagában ismert módszerekkel végezzük. A védőcsoportok eltávolítására például a következő reakciókat alkalmazhatjuk: redukció fém-nátriummal, folyékony ammónia jelenlétében, hidrogenolízis (például palládium/csontszén katalizátor jelenlétében végzett hidrogénezés), reakció hidrogénhalogenidekkel (például sósavval vagy hidrogénbromiddal) ecetsavas közegben, trifluorecetsavas kezelés. A védőcsoportok bevitelére, illetve lehasítására olyan reagenseket és reakciókörülményeket kell alkalmaznunk, amelyek a peptid-szintézist nem befolyásolják hátrányosan, és a peptid-láncot nem károsítják. Egyes esetekben a védőcsoportok lehasítására szelektív reagenseket kell alkalmaznunk. A találmány szerinti eljárással az I általános képletű vegyületek 25-75%-os kitermeléssel állíthatók elő. A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. Amennyiben egyebet nem közlünk, a részmennyiségeken súlyrészeket értünk. A termékeket vékonyrétegkromatográfiás úton azonosítottuk. Az Rf-értékeket az alábbi oldószer-rendszerekben határoztuk meg. (A) 80:20:2 (kloroform : metanol : ammóniumhidroxid) (B) 60:40:10 (kloroform : metanol : vízi (C) 50:40:10 (kloroform : metanol : ammóniumhidroxid) (D) 80 : 20 : 2 (kloroform : metanol : víz) (E) 70 : 30 : 3 (kloroform : metanol : víz) (az oldószer arányokat térfogatszázalékban adtuk meg.) 1. példa A lépés: L-2-Keto-imidazolidin-5-karbonsav előállítása 25 g nátriumhidroxid 760 ml vízzel készített oldatához keverés és hűtés közben 5 ml brómot adunk. Amikor az elegy hőmérséklete eléri a kb. 0 °C-ot, az elegyben 26,6 g Na-benziloxikarbonil-aszparagint oldunk. Ezután az oldatot 75 °C-ra melegítjük, 45 percig ezen a hőmérsékleten tartjuk, majd lehűtjük és 2-szer 150 ml metilénkloriddal extraháljuk. Az extraktumot szárazra pároljuk, a szilárd maradékot éjszakán át vákuumban szárítjuk, majd etanollal extraháljuk. Az extraktumot a termék kiválásáig bepároljuk. A terméket leszűrjük és vákuumban szárítjuk. 4,20 g L—2—keto-imidazolidin-5-karbonsavat kapunk, op.: 166—170 °C. Elemzési adatok: számított: C =36,93%, H =4,65%, N = 21,5%, talált: N =34,87%, H = 4,52%, N = 19,5%. B lépés: L—2—Keto-imidazolidin-5-karbonil-L-hisztidil-L-prolin—OCH3 előállítása 19,8 g (6,36 mmól) Na-terc-butoxikarbonil-N3im-2,4-dinitro-fenil-L-hisztidil-L-prolin-„F’, 2,0 mólekvivalens L-2-keto-imidazolidin-5-karbonsav, 2,0 mólekvivalens diciklohexil-karbodiimid és 1,3 g 1-hidroxi-benztriazol dimetilformamidos elegyét körülbelül 5 órán át szobahőmérsékleten tartjuk. Ekkor a reakció lényegében teljes mértékben lezajlik, és az L-Kic-N3im-DNP-L-His-L-Pro-,,P”-t 98%-os hozammal kapjuk. A dinitrofenil-védőcsoportot HSC2H4OH/DMF rendszerrel hasítjuk le, és a termékként kapott L-Kic-L-His-L-Pro—„P”-t ecetsavval, metanollal és diklórmetánnal mossuk. 4,7 g mosott L—Kic—L— His-L-Pro-„P”, 188 ml metanol és 47,1 ml trietilamin elegyét 5 napon át szobahőmérsékleten keverjük, majd körülbelül 6 napon át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az elegyet szűrjük, a szűrletet szárazra pároljuk, és a maradékot szilikagélen (arány: 200 : 1) kromatografáljuk. Eluálószerként 70 : 30 :3 térfogatarányú kloroform — metanol - víz elegyet használunk. Az effluenst fagyasztva szárítjuk. 1,54 g L-Kic-L-His-L-Pro-OCHa-t kapunk. Rf = 0.77(E). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
