174606. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tripeptidek előállítására
11 174606 12 L-2-keto-imidazolidin-5-karbonil-L-hísztidil-L-prolin-amid előállítása 0,8 g L—Kic—L—His—L—Pro—OCH3 és körülbelül 10 ml folyékony ammónia elegyét 7 napon át szobahőmérsékleten tartjuk. A reakcióelegyet metanolban oldjuk, az oldatot vákuumban bepároljuk, és a maradékot fagyasztva szárítjuk. L-Kic-L—His—L—Pro—NH2-t kapunk. Rf = 0,46(B). 2. példa D, L—2—Ke to-piperidin-6-karbonil- L-hisztidil-L-prolin-metilészter és -amid előállítása Az 1. példa B. és C. lépésében leírtak szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy L-2—Keto-imidazolidin-5-karbonsav helyett DL-2-keto-piperidin-6-karbonsavat használunk fel. Termékként DL-Kpc—L-His—L-Pro-OCH3-t, illetve DL-Kpc-L-His-L-Pro-NH2-t [Rf = 0,41 (A)] kapunk. Az 1. példa B. lépésében leírt eljárással állítjuk elő az alábbi tripeptideket: Kpc—His—Tea—OC2 H5, DL-Pyr-L-His-L-Tca-OC6H! 2 és Kic-His—L-Pip-OC(CH3 )3. E vegyületeket az 1. példa C. lépésében leírt módon a megfelelő amidokká alakítjuk. C lépés: 3. példa A lépés: L-Piroglutamil-L-hisztidin—OCH3 előállítása Keverővei és külső hűtéssel felszerelt lombikba 72,9 g L—hisztidin-metilészter-dihidrokloridot, 39,1 g L-piroglutaminsavat és 1200 ml acetonitrilt mérünk be. Az elegyet keverés közben 0 °C-ra hűtjük, és 0 °C-on, keverés közben, részletekben, 10 perc alatt 84 ml trietilamint adunk hozzá. Az elegyet 15 percig állni hagyjuk, majd az elegyhez részletekben, 5-10 perc alatt 76,5 g diciklohexil-karbodiimid 180 ml acetonitrillel készített oldatát adjuk. A kapott elegyet 30 percig 0 °C-on tartjuk, majd szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni, és 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az elegyet szűrjük, és a szűrőlepényt 3-szor 100 ml acetonitrillel mossuk. Ezt a szűrletet elöntjük. A mosott szűrőlepényt 4-szer 150 ml metanollal feliszapoljuk. Az így kapott szűrletet vákuumban 300 ml végtérfogatra bepároljuk, majd a koncentrátumhoz lassú ütemben, keverés közben 1200 ml étert adunk. Az elegyet éjszakán át állni hagyjuk (30 perces állásidő elegendő), majd szűrjük. A szűrőlepényt 2-szer 75 ml 9:1 térfogatarányú dietíléter - metanol eleggyel mossuk, majd 500 ml kloroformmal elegyítjük, és az elegyet 2 órán át keverjük. A szilárd anyagot kiszűrjük, és a szűrőlepényt 4-szer 45 ml kloroformmal mossuk. A kapott, 42,1 g súlyú mosott szűrőlepényt 168 ml metanolhoz adjuk, és az elegyet gyors ütemben forrásig melegítjük. A forró elegyet szűrjük. A szűrletet szobahőmérsékletre hagyjuk hűlni, és 3 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált fehér, kristályos L-piroglutamil-L-hisztidin-OCH3-t kiszűrjük és 10 ml metanollal mossuk. A terméket szárítjuk. 24,1 g (28,7%) terméket kapunk, op.: 208-210 °C. A termék tisztasági foka vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat alapján 99%. B lépés: L-Piroglutamil-L-hisztidin-hidrazid előállítása Hőmérővel és keverővei felszerelt, jégfürdőbe merített lombikba 33,6 g L-piroglutamil-L-hisztidin—OCH3-t mérünk be, és ezt 640 ml metanolban oldjuk. Amikor az oldat hőmérséklete elérte a 10°C-ot, az elegyhez 5 perc alatt, részletekben 400 ml 97%-os vízmentes hidrazint adunk, ügyelve arra, hogy az elegy hőmérséklete ne emelkedjék 20 °C-nál magasabb értékre. A reakcióelegyet 6 percig 18—20 °C-on keverjük, majd egy másik lombikba töltjük, és vákuumban bepároljuk. A kapott fehér, szilárd anyagot 1040 ml 2BA-etanolban (benzollal denaturált, abszolút etanol) diszpergáljuk, majd az etanolt lepároljuk. Ezt a műveletet még egyszer megismételjük. Ezután a kapott, fehér, szilárd anyagot 800 ml dimetilformamidban diszpergáljuk, és a diszperziót vákuumban 230 g súlyig bepároljuk. A kapott anyagot 800 ml etanolban diszpergáljuk, az elegyet 45 percig szobahőmérsékleten áll rá hagyjuk, majd szűrjük. A szűrőlepényt 2-szer 80 ml etanollal mossuk, majd szárítjuk. A kapott terméket 3200 ml metanolban diszpergáljuk, és az elegyet forrásig melegítjük. Az elegyet keverés közben szobahőmérsékletre hagyjuk hűlni, majd szűrjük, és a szűrőlepényt 2-szer 60 ml metanollal mossuk. A terméket vákuumban szárítjuk. 25,69 g (76,5%) L-piroglutamil-L-hisztidin hidrazidot kapunk. A termék vékonyrétegkromatográfiás elemzés alapján lényegében tiszta. C lépés: L-Piroglutamil—L—hisztidil-L-tiazolidin-4- -karbonsavamid előállítása 800 mg (3 mmól) L-piroglutamil-L-hisztidin-hidrazid 80 ml dimetilformamiddal készített szuszpenzióját -20 °C-ra hűtjük, és 5,9 mólos tetrahidrofurános sósavoldattal pH=l,5 értékre savanyítjuk. Az elegyhez 4 ml 10%-os dimetilformamidos izoamilnitrit-oldatot adunk, és 25 percig —20 °C-on keveijük. Ezután az elegyhez 500 mg (3 mmól) L-tiazolidin-5-karbonsavat adunk, és 4,1 nú trietilaminnal pH = 8,5 értékre lúgosítjuk. A kapott elegyet 7 napon át -15 °C-on tároljuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
