174503. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új N-E-trimetil-L-lizin-sók előállítására
5 174503 6 kötött aktivitás mértékét. A kapott eredmények az alábbiak (a táblázatban cpm az oszcillográf által jelzett beütések számát jelenti): Idő 3H TdR felvétel (cpm) (óra) TML.2HC1 TML.Glu Kontroll 1. 2. 3. 4. 48 146 594 123-756 167 413 72 295 3010 159 303 2427 254 1413 96 231 2825 271 330 2878 301 3659 Azt, hogy a nyugvó sejtek aktív fázisba kerülnek, az bizonyítja, hogy szaporodásnak indulnak. Megvizsgáltuk ezért az össztumorsejtszám alakulását is. NK/Ly ascites tumort 20 db nőstény CFLP egérre oltottunk. Az oltás után 24 órával 10 db állatnak 8 napon át naponta 100 mg/kg TML.Glu-ot adtunk be, 10 állat kontrollként szolgált. Az egereket 9 nappal a tumor beoltása után leöltük, és meghatároztuk az állatok súlyát és az össztumorsejtszámot. Azt találtuk, hogy a kezelés hatására az össztumorsejtszám a kontrolihoz viszonyítva 35^-kal emelkedett. Végül tanulmányoztuk a TML.Glu hatását egerek humorális és celluláris immunválaszára. Összehasonlító anyagként Levamisol-t (L-6-fcnil-2,3,5,6- -tetrahidro-imidazo[2,l-b]tiazol) használtunk. A vizsgálatokat 10—10 db 2 hónapos nőstény DBA/2 egérből álló csoportokon végeztük, antigénként birkavörösvértesteket alkalmaztunk i.p. Pozitív kontrollként E. coli endotoxint és 2—5 mg/kg egyszeri Levamisol kezelést adtunk. A TML.Glu-ot két héten belül ötször 100 mg/kg dózisban adtuk be i.p. előkezelésként és egyszeri 100 mg/kg dózisban i.p. szintén az antigén adása előtt. A haemagglutinin titert Takácsy-féle mikrotitrátor segítségével határoztuk meg. Azt találtuk, hogy az egyszeri kezelés TML.Glu-tal hatástalan, viszont az ismételt előkezelés ugyanolyan titeremelkedést ad, mint a Levamisol. Míg azonban a Levamisol különböző mellékhatásokat mutat, így például a gyomor- és béltraktusra káros hatást gyakorol, a TML.Glu-nak nincs mellékhatása, egy olyan anyag sója, amely a szervezetben is előfordul. A celluláris immunválaszra vonatkozóan a Legrange és munkatársai által leírt kísérleti modellt alkalmaztuk. Ennek lényege az, hogy ismételt antigén (birkavörösvértest) adása után az egerek talp-vastagsága növekszik. A növekedés mértékét általában azok a szerek, amelyek a humorális immunválaszt stimulálják, a kontrolihoz képest először csökkentik, majd néhány nap múlva a már csökkent kontroll értékhez képest fokozzák, azt tapasztaltuk, hogy ez a jelenség TML.Glu-tal végzett előkezelés esetén (ötször 100 mg/kg, két héten belül) is bekövetkezik. A fenti kísérleti eredmények alapján TML.Glu előnyei az alábbiakban foglalhatók össze. 1. Minthogy számos sejtet érzékennyé tesz a citosztatikumokkal szemben, citosztatikumokkal kombinálva jól használható a daganatkemoterápiában. 2. A vérképre, valamint a bélnyálkahártyán kifejtett, proliferatiot fokozó hatása révén megfelelő időpontban adagolva csökkenti a citosztatikumok toxikus hatását. 3. Önmagában adva is javítja a vérképet, például daganatos anaemia, de más eredetű anaemia esetében is. 4. Immunstimuláns hatása daganatos betegségek, de egyéb, humorális immunitás csökkenésével járó esetek kezelésében is jól hasznosítható. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. A példákban alkalmazott rövidítések a szakirodalomban használt rövidítéseknek felelnek meg [J. Biol. Chem. 247 977 (1972)]. További rövidítés: 7ML - N-e-trimetil-L-lizin. A vegyületek előállítása során a bepárlásokat mindig Büchi-féle Rotavapor készülékben végeztük. Az olvadáspont meghatározások Tottoli-féle (Büchi) készülékben történtek. A vékonyrétegkromatogramokat Fixion rétegen készítettük. Futtató elegy - ként 50 g citromsav, 50 g NaOH és 7 ml tömény sósav 500 ml deszt. vizes oldatát használtuk. A kromatogramok előhívását 80 ml metanol, 20 ml jégecet, 0,2 g ninhidrin és 0,1 g réz(Il)-szulfát oldatával végeztük. I. példa N-e-trimetil-L-lizin-monoglutaniát 50,0 g (0,265 mól) vékonyrétegkromatográfiásan egységes N-e-trimetil-L-lizint 500 ml desztillált vízben feloldunk, és 50 °C-ra történt felmelegítés után egyesítjük 39,0 (0,265 mól) L-glutaminsavnak 500 ml desztillált vízzel készített, ugyancsak 50 °C-os oldatával. A kapott oldatot ezen a hőmérsékleten 30 percig keverjük, majd 5 g Norit derítő szenet adunk hozzá. Pár perces keverés után az oldatot szűrjük, és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A bepárlás során az oldat hőmérséklete nem haladhatja meg az 50 C-ot. Az így kapott kristályos maradékot ezután vákuumban foszforpentoxid mellett súlyállandóságig szárítjuk. Hozam: 95-98 g N-e-trimetil-L-lizin monoglutamát. Olvadáspont: 104-107 °C [ajp5 =+5,15° (c=l, víz). Aminosav analízis: Glu: 1,0(1), TML (1,13(1). Elemzési eredmények Ci4H30O6N3 • 2H20 összegképlet alapján: számított: C = 45,2%, N = 11,3%, talált: C =45,6%, • N=ll,2%. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
