174500. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kolecisztokinin-pankreozimin oktapeptidamid -szulfátészter előállítására
7 174500 8 c) terc-Butiloxikarbonil-L-metionil-glicih -N'-formil-L-triptofil-L-metionil-L-aszparagil-L-fenilalaninamid 25,3 g N-terc-butiloxikarbonil-N'-formil-L-triptofil -L-met io nil-L-asz par agil -L -fenilalaninamidot (35 mmól) 120 ml n jégecetes sósavban oldunk. 90 perc múlva az oldatot telére pároljuk és a tetrapeptidamid-hidrokloridot 500 ml éterrel kicsapjuk, szűrjük, éterrel mossuk, szárítjuk (kitermelés: 20,3 g, 88%, op.: 207-209 °C). A fenti módon nyert 3,3 g tetrapeptidamid-hidrokloridot (5 mmól) és 2,77 g terc-butiloxikarbonil-L-metionil-glicin-pentaklórfenilésztert (5 mmól) 25 ml dimetilformamidban oldunk, az oldathoz 1,11 ml N-metil-morfolint (10 mmól) adunk. 24 óra után a reakcióelegyet vákuumban felére pároljuk, majd keverés közben 50 ml 5%-os káliumhidrogénszulfát-oldat és 30 ml éter elegyébe öntjük. A csapadékot szűrjük, vízzel, majd éterrel mossuk, szárítjuk. 3,7 g (81%) védett hexapeptidamidot nyerünk. Op.: 175-179 °C, Rf3 = 0,45. d) terc-Butiloxikarbonil-L-tirozil-L-metionil-glicil-N'-formil-L-triptofil-L-metionil-L-aszparagil-L-fenilalaninamid 3,65 g terc-butiloxikarbonil-L-metionil-glicil-N1- -formil-L-triptofil-L- metionil-L-aszparagil-L-fenilalaninamidot (4 mmól) 15 ml n jégecetes sósavban oldunk. A hexapeptidamid-hidrokloridot 30 perc múlva 300 ml éterrel kicsapjuk, szűrjük, éterrel mossuk, szárítjuk (3,2 g, 94%). Op.: 130—132 °C. 3,2 g hexapeptidamid-hidrokloridot (3,77 mmól) és 1,84 g terc-butiloxikarbonil-L-tirozin- 2,4,5-triklórfenilésztert (4 mmól) 25 ml dimetilformamidban oldunk, az oldathoz 0,9 ml N-metil-morfolint (8 mmól) adunk. A reakcióelegyet 24 órás állás után felére bepároljuk, majd keverés közben 50 ml 5%-os káliumhidrogénszulfát-oldat és 30 ml éter elegyébe öntjük. A csapadékot szűrjük, vízzel, majd éterrel mossuk, szárítjuk. 3,7 g (92%) védett heptapeptidamidot kapunk. Rf3 = 0,55. e) terc-Butiloxikarbonil-(3-terc-butil-L-aszparagil-L-tirozil-L-metionil -glicil-L-N'-formil-triptofil-L-metionil-L-aszparagil-L-fenilalaninamid 3,7 g terc-butiloxikarbonil-L-tirozil-L-metionil-glicil-N'-formil-L-triptofil- L-metionil-L-aszparagil-L-fenil-alaninamidot (3,45 mmól) 15 ml jégecetes sósavban oldunk. A heptapeptidamid-hidrokloridot 30 perc múlva 300 ml éterrel kicsapjuk, szűrjük, éterrel mossuk, szárítjuk (3,45 g, 99%). 3,04 g heptapeptidamid-hidrokloridot (3,0 mmól) és 1,7 g terc-butüoxikarbonil-0-terc-butil-aszparaginsav-pentaklórfenilésztert (3,17 mmól) 20 ml dimetilformamidban oldunk, az oldathoz 0,7 ml N-metil-morfolint (6,3 mmól) adunk. A reakcióelegyet 24 óra múlva 50 ml 5%-os káliumhidrogénszulfát-oldat és 30 ml éter elegyébe öntjük. A csapadékot szűrjük, vízzel, majd éterrel mossuk, szárítjuk. 3,01 g (80%) védett oktapeptidamidot kapunk. Rf3 = 0,7. 2. példa L-Aszparagil-O-szulfáto-L-tirozil-L--metionil-glicil-L-triptofil-L-metionil-L-aszparagil-L-fenilalanin--amid-monokáliumsó Az 1. példa szerinti módon járunk el, azonban nátriumhidroxid helyett ekvivalens mennyiségű káliumhidroxidot alkalmazunk. A termék olvadáspontja nem jellemző, [a]^2 =-22,4° (c=l, dimetilformamidban). 3. példa L-Aszparagil-O-szulfáto-L-tirozil-L--metionil-glicil-L-triptofil-L-metionil-L-aszparagil-L-fenilalaninamid-lizinsó a) 1,2 g, az 1. példa szerinti módon előállitott L - a s z p a ragil-O-szulfáto-L-tirozil- L-metionil-glicil--L-triptofil-L-metionil-L-aszparagil-L-fenilalanin-amid-mononátriumsót 20 ml víz és 20 ml metanol elegyében feloldunk, és az oldatot 200—400 mesh méretű Dowex 50 x 2 ioncserélő oszlopon (H+-ciklus, 100 ml) engedjük át. Ezután a kapott szabad savat liofrlizálással elválasztjuk. így 1,0 g terméket kapunk, amelynek aminosav analízise az alábbi: Gly: 1,00. Asp: 1,98, Tyr: 0,95, Trp: 0,90, Met: 1,79, Phe: 1,10. b) A kapott 1,0 g szabad savat 50 ml víz és 10 ml metanol elegyében feloldjuk, és az oldathoz hozzáadunk 375 mg L-lizint. A reakcióelegyet oldódásig keverjük, majd bepároljuk. A maradékot aceton és éter 1 : 2 arányú elegyével megszilárdítjuk és leszűrjük. Ily módon 1,3 g fehér színű, amorf anyagot kapunk, melynek olvadáspontja nem jellemző. Aminosav analízis: Gly: 1,00, Asp: 2,10, Tyr: 0,93, Lys: 2,85, Trp: 0,92, Met: 1,82, Phe: 1,05. 4. példa L-Aszparagil-O-szulfáto-L-tirozil-L-metionil-glicil-L-triptoftl-L-metionil- L-aszparagil-L-fenilalanin-amid-hisztidinsó A 3. példa szerinti módon járunk el, azonban L-lizin helyett ekvivalens mennyiségű hisztidint alkalmazunk. A kapott termék olvadáspontja nem jellemző. Aminosav analízis: Gly: 1,00, Asp: 1,98, Tyr: 0,90, His: 2,90, Trp: 0,98, Met: 1,80, Phe: 0,96. 5. példa L-Aszparagil-O-szulfát-L-tirozil-L-metionil-glicil-L-triptofil-L-metionil-L-aszparagil -L-fenilalanin-amid-tri-ammóniumsó A 3. példa a) lépése szerint előállított szabad savat (1,0 g) 50 ml víz és 10 ml metanol elegyében 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
