174433. lajstromszámú szabadalom • Eljárás virusellenes-hatású tiazolinil-benzimidazol származékok előállítására
19 174433 20 számított: C =48,38%, H =4.87%, N =33,85%, talált: C =48,19%, H =4,93%, N =33,61%, (B) 1 -izopropil-5-(3,4-diamino-fenil)-tetrazol, hozam: 70 százalék. Az analízis eredményei a C,oH,4N6 (molekulasúly: 218) összegképletre: számított: C = 55,03%. H = 6,47%. N =38,50%. talált: C = 55,23%, H =6.27%. N =38,73%. (C) l-izopropil-5-[2-amino-benzimidazol-5(6)-il]-tetrazol. olvadáspont: 232-233 °C. hozam: 7,3 g (86 százalék). Az. analízis eredményei a C,iHt3N7 (molekulasúly: 243) összegképletre: számított: C =54.31%. H =5,39%, N =40,30%, talált: C = 54.56%, H =5.54%, N =40,53%, (D) 1 -(2-tiazolinil)-2-amino-5(6)-( 1 -izopropil-tetrazol-5-il)-benzimidazol Az 1 általános képletü vegyületek széles spektrumú vírusellenes hatással rendelkeznek. Nem speciálisan csak echo vírus. Mengo-vírus. Coxsackie (A9. 21, B5) vírusok, I, II, III típusú poliovírusok vagy rhinovírusok (25 törzs) fejlődését gátolják, hanem különböző típusú influenzavírusok, például Ann Arbor. Maryland B, Massachuttes B, Hong Kong A, Pr—8a és Taylor C (A, B típusok) fejlődését is gátolják. A találmány oltalmi körébe tartozó 1 általános képletű vegyületek különböző vírusok fejlődését gátló képessége in vitro könnyen kimutatható a Siminoff által az Applied Microbiology 2 (1). 66-72 (1961)-ben leírthoz hasonló foltgátló vizsgálat alkalmazásával. Az alkalmazott speciális vizsgálatokat részleteiben alább írjuk le. Vizsgálati módszerek Afrikai kabócamajom vesesejteket (BSC—1 ) vagy HeLa sejteket tenyésztünk 25 ml-es Falcon palackokban 37 °C-on 5 százalék inaktivált borjúmagzat-szérumot (FBS). 150egység/ml penicillint és 150 mg/ml streptomicint tartalmazó 199-es tápoldatban. Mikor összefüggő réteg képződik, a tápoldatot eltávolítjuk, és 0.3 ml megfelelő hígítású vírust (echovírus, Mengo-vírus, Coxsackie-vírus, poliovirus vagy rhinovírus) adunk minden egyes palackba. Szobahőfokon egy óra abszorpció után a vírussal fertőzött sejtréteget egy rész egyszázalékos lonagar No. 2-ből és egy rész kétszeres erősségű, FBS-t, penicillint és streptomicint tartalmazó 199 tápoldatból álló tápoldattal fedjük le, amely 100, 50, 25. 12. 6, 3 és Ojig/ml drogot tartalmaz. A drogot nem tartalmazó palack szolgál vizsgálati kontrollként. Az I általános képletű tiazolinil-benzimidazol-vegyületek törzsoldatait 104 jag/ml koncentrációjú dimetil-szulfoxidos oldatból készítjük. A palackokat 37 °C-on 72 órát inkubáljuk poliovirus, Coxsackie-vírus, echovírus és Mengo-vírus esetében, és 32 °C-on 120 órát rhinovírus esetében. Az Ann Arbor. Maryland B. Massachusetts B, Hong Kong A, Pr-8a és Taylor C (A, B típusok) influenzavírusokat 72 órát inkubáljuk 37 °C-on MDCK sejteket (Madin-Darby kutya vesesejteket) alkalmazva. Azokon a területeken, ahol a vírus fertőzött, és szaporodott a sejtekben, foltok látszanak. A vírus inaktiválására és a sejtrétegnek a palack felületéhez való rögzítésére minden egyes palackba 10 százalék formaiint és 2 százalék nátrium-acetátot tartalmazó oldatot töltünk. A vírusfoltokat a környező sejtterület kristályibolyával való állása után megszámoljuk, a méreteket figyelmen kívül hagyva. A foltszámot minden egyes drogkoncentrációnál a kontrollszámhoz viszonyítjuk. A vizsgált vegyület aktivitását százalékos foltcsökkenésben vagy százalékos gátlással fejezzük ki. Hasonlóképpen az I50 jellel jelzett drogkoncentráció, amely a foltképződést 50 százalékkal gátolja, szintén használható az aktivitás mérésére. Az eredményeket az I típusú poliovírus-gátlás értékeiban adjuk meg. mivel ez a vírus könnyen tenyészthető, és egyértelmű eredményeket ad. Az I általános képletű vegyületek hatását azonban más víruskultúrákkal, például Coxsackie (A9. A21, B5), echovírus (1—4 törzzsel), Mengo-vírus, rhinovírus (25 törzs), poliovirus (I, II, III típus) és influenza-vírusokkal. például Ann Arbor, Maryland B, Massachusetts B, Hong Kong A, Pr-8a és Taylor C (A. B típusok) vírustörzsekkel szemben is igazoltuk. A különböző tiazolinil-benzimidazol-vegyületekre vonatkozó vizsgálati eredményeket alább az I. táblázatban összegezzük. A táblázatban az első oszlopban megadott szám az előbbi példa számát jelenti, amelyben az illető vegyületet előállítottuk, a 2. oszlopban az 5(6) izomer helyzete szerepel, és a 3—10. oszlopokban a százalékos vírusfolt-csökkenés szerepel 100-0.75 Mg/ml drogkoncentrációknál. Az 1 -tiazolinil-benzimidazolszármazékokat tiszta izomerekként és izomer keverékekként is megvizsgáltuk. Mindkét izomer gátolja a vírusfejlődést, a 6-izomer általában hatásosabb, mint az 5-izomer. A találmány körébe tartozó I általános képletű vegyületek számos vírus növekedését gátolják, ha ahhoz a közeghez adják őket, amelyben a vírus nő. Az I általános képletű vegyületek ezért vizes oldatban, előnyösen valamilyen felületaktív anyaggal együtt, használhatók olyan felületek fertőtlenítésére. amelyeken poliovirus, Coxsackie-vírus, rhinovírus és influenzavírusok vannak. Ilyen felületek például a kórházi üvegeszközök, kórházi munkahelyek és hasonló - például élelmiszerek készítésére használt - területek. A vegyületek továbbá szájon át adhatók melegvérű állatoknak és embereknek 1 —300 mg/testsúlykilogramm-adagban. Az adagolás szükség esetén időszakonként ismételhető. Az általános gyakorlat szerint a vírusellenes hatású vegyületet négy-hat óránként adjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
