174399. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ergoszterin és ubikinon-9 élesztők biolipid frakciójából történő egyidejű kinyerésére
5 174399 6 Mint a fentiekben említettük, az ergoszterin és ubikinon-9 előállításához kiindulási nyersanyagként valamely biolipid-frakciót alkalmazunk. Az eljáráshoz bármely biolipid-frakció alkalmas, amelyet az ergoszterin és ubikinon-9-et termelő élesztőgombák, például Candida-fajta élesztőgombák biomasszájából nyerünk, függetlenül attól, hogy a termelő mikroorganizmust milyen eljárással tenyésztettük. A biolipid-frakciót például úgy állítjuk elő, hogy Candida quilliermondii H II—4 élesztőgombát valamely táptalajon, mely nitrogént, foszfort és nyomelemeket, valamint szénhidrogénforrásként kismennyiségű 11-23 szénatomos n-alkánt tartalmaz, tenyésztünk. A biomasszát leválasztjuk a táptalajból és szárítjuk. Ezután a száraz biomasszát petroléterrel extraháljuk. Az extraktumot elválasztjuk a fehéije-koncentrátumtól, majd bepároljuk. Az így kapott anyag a biolipid-frakció. Keverővei, visszafolyató hűtővel és fűtéssel ellátott reakcióberendezésbe biolipid-frakciót, alkoholos alkálifémhidroxidot és pirogallolt töltünk. Az elegyet keverés közben forraljuk. A hidrolizált elegyet lehűtjük, vízzel hígítjuk és valamely említett extrahálószerrel egy alkalmas módszerrel, például ellenáramú extrakcióval, keverő- és ülepítő berendezés felhasználásával extraháljuk. Az extrakció során az el nem szappanosítható komponenseket az extrahálószemek a vizes fázistól való elválasztásával távolítjuk el. A vizes fázis az elszappanosított, vízoldható alkotórészeket tartalmazza. A leválasztott extraktumot semleges reakcióig vízzel mossuk, lepárló edényben addig kezeljük, amíg a lepárlási maradékban az ergoszterin kristályok meg nem jelennek. A lepárlási maradékot a berendezésből eltávolítjuk, hűtjük és az ergoszterint a maradékból valamely alkalmas módszerrel, például szűréssel, centrifugálással elválasztjuk. Az elválasztott ergoszterint petroléterrel mossuk és etilalkohol-benzol elegyéből átkristályosítjuk. A kapott ergoszterin tisztasági foka 95—98%. Ezután az ergoszterin leválasztása során visszamaradt anyalúgból az ubikinon-9-et választjuk le. Ezt oly módon végezzük, hogy az anyalúgból az extrahálószer maradékát eltávolítjuk, majd a kapott olajos maradékot például alumíniumoxiddal, kovasawál, szilikagéllel töltött kolonnán adszorbciós kromatográfiának vetjük alá. A kolonnáról a sárga színű, ubikinon-9-et tartalmazó csíkokat petrolétert és dietilétert tartalmazó eleggyel eluáljuk. Az eluátumból az oldószert eltávolítva a maradékot etilalkoholból vagy acetonból átkristályosítjuk. A kapott ubikinon-9 tisztasági foka 95-100%. Ha n-alkán tartalmú táptalajon tenyésztett élesztőgombák biomasszájából származó biolipid-frakciót alkalmazunk, úgy a n-alkánokat pótlólagos műveletekkel távolítjuk el, mégpedig a kromatografálás előtt, az olajos maradéknak acetonban való feloldásával és kifagyasztással. A találmány szerinti eljárás a következő előnyökkel rendelkezik: Az eljárással lehetővé válik egy technológiai szakaszon belül az ergoszterin és ubikinon-9 egyidejű kinyerése, megközelítően 100%-os tisztasággal. Az ergoszterin-hozam 10-15 g/kg biolipid-frakció, az ubikinon-hozam 1,2-1,7 g/kg biolipid-frakció. A biolipid-frakció felhasználásán alapuló eljárás lehetővé teszi termelő mikroorganizmusként ipari, a takarmány és étfehéije termelésénél alkalmazott élesztőtörzsek, például a Candida-élesztők felhasználását. Az ismert eljárásoknál ezzel szemben az ubikinon-9 előállításához ugyanennek a nemzetségnek egy külön szelektált törzse szükséges. A találmány értelmében élesztőgombák biomasszájából származó biolipid-frakciót használunk, ami nem függ a tenyésztési eljárástól. Az egyes ipari ágazatokban a biolipid-frakció hulladékként jelenik meg, mint például az n-alkán tartalmú táptalajon tenyésztett Candida-fajta élesztőgombák felhasználásával történő fehéije-vitaminkoncentrátumok előállítása során. A biolipid-frakció nak a biomasszából való leválasztásával javul a takarmánykoncentrátumok fehérjetartalmának minősége, ami egyúttal a takarmánykoncentrátum tárolási idejét növeli, összességében tehát a fehérje-vitaminkoncentrátumok előállítási eljárására hasznos és előnyös a biolipid-frakció leválasztása. A találmányt az alábbi példák szemléltetik: 1. példa A biolipid-frakciót a következőképpen állítjuk elő: Candida guilliermondii H II—4 élesztőgombát, nitrogént, foszfort és nyomelemeket, valamint szénhidrogénforrásként kismennyiségű 11-23 szénatomos n-alkánt tartalmazó elegyből álló táptalajon levegőztetés mellett tenyésztünk. A biomasszát a tenyésztalajtól elválasztjuk és szárítjuk. A biolipid-frakció elkülönítéséhez 70 kg száraz biomasszát 280 liter petroléterrel extrahálunk. Az extrahálást 6-8 órán át végezzük. Az extraktumot a fehéije-koncentrátumtól elválasztjuk és 40 °C hőmérsékleten vákuumban bepároljuk. Az oldószer tökéletes eltávolítása után 7 kg biolipid-frakciót kapunk (fajlagos súly 0,96 g/cm3), melynek összetétele súlyszázalékban a következő: szénhidrogének 7,2 foszfolipidek 30 $iceridek 43 szterolok 1,5 szabad zsírsavak 15 ubikinon-9 0,18 a maradék meg nem határozható szennyeződés. A kapott mennyiségű biolipid-frakciót keverővei, visszafolyató hűtővel és fűtőberendezéssel ellátott 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
