174399. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ergoszterin és ubikinon-9 élesztők biolipid frakciójából történő egyidejű kinyerésére
7 174399 8 reakcióberendezésbe visszük. Ugyanabba a reaktorba 14 liter metanolból, 1,4 kg káliumhidroxidból és 0,14 kg pirogallolból álló oldatot viszünk. Az elegyet 45 percen át keverés közben forraljuk, majd 15—20 °C-ra lehűtjük és extraháló be rendezés be töltjük, amelybe 35 liter vizet töltünk. Az el nem szappanosítható biolipid-frakciót háromszor egymás után 28, 14, 14 liter dietiléterrel extraháljuk. Az egyesített éteres extraktumokat addig mossuk, amíg a mosóvíz semleges reakciót mutat. Az éteres oldatot kb. 2 liter bepárlási maradékig bepároljuk. A desztillációs maradékot dekantáljuk, -5 °C-ra lehűtjük és 3 órán át ezen a hőmérsékleten tartjuk. A kivált ergoszterint elválasztjuk, petroléterrel mossuk és vákuumos szárító berendezésben 45-50 °C-on szárítjuk. 98,8 g, 85%-ban ergoszterint tartalmazó terméket kapunk. Átkristályosítással etilalkohol/benzol 4 :1 arányú elegyében 79 g, 98% ergoszterin-tartalmú terméket kapunk. Az olvadáspont 156-159 °C. Színtelen kristályok, amelyek Sacchromyces cerevisiae élesztőgombából nyert ergoszterin próbával összehasonlítva nem mutatnak olvadáspont depressziót. Az etanolos ergoszterin-oldat UV spektrumának maximális szorpciója: 262> 27 !> 282> 293 nm. Az ergoszterin leválasztása után az anyalúgból az oldószert teljesen eltávolítjuk. Hosszúszénláncú n-alkánok eltávolítása céljából a maradékot -6 °C-on 2 liter acetonnal kifagyasztjuk, majd szűrjük és az oldatot szárazra bepároljuk. A visszamaradt olajos terméket 3% vízzel dezaktivált alumíniumoxiddal töltött kolonnán kromatografáljuk. Az eluálást petroléterrel végezzük, míg a kolonnánból az összes szénhidrogént eltávolítjuk, majd ezt követően a narancssárga zónát, mely az ubikinon-9-et tartalmazza, a petroléter és dietiléter 80 :20 arányú elegyével eluáljuk. Az ubikinon-9 tartalmú eluátumot legfeljebb 35 °C-on bepároljuk. A maradékot abszolút etilakoholból kikristályosítjuk. A kicsapódott ubikinon-9-et leszűrjük és szárítjuk. Sárga kristályok alakjában 9,5 g ubikinon-9-et kapunk, amely 97,9% tisztaságú. Olvadáspont 43,6-44,4 °C. Az oxidált és redukált ubikinon-9 etanolos oldata UV spektrumának maximális szorpciója: Cx°' (oxidált) 272nm, E}^m 180, xma"0' (redukált) 290 nm, E}^m50,5. Az oxidált és redukált ubikinon-9 etanolos oldatának tömegspektruma: M/e: 794 (M*), 796 (M + 2)+, 779 (M—15)+, 235, 197. 5 2. példa Candida tropicalis H-30 nyers élesztőből a biolipid-frakciót acetonnal végzett extrakcióval vá- 10 lasztjuk. le. Az acetonos extraktumból a zsíroldható alkotórészeknek n-hexánba vagy petroléterbe való átvitele céljából az acetonos oldathoz vizet adunk (2:1 arányban) és a zsíroldható alkotórészeket petrol- 15 éterrel vagy n-hexánnal háromszor extraháljuk, aholis az utóbbit 1 : 2 arányban adjuk az acetonos oldathoz. 170 g élesztőből (nedvességtartalom 81%) 7,5 g biolipid-frakciót kapunk. A biolipid-frakció további kezelését az ergoszterin és ubikinon-9 ki- 20 nyerése céljából az 1. példában leírt módon hajtjuk végre. 78 mg, 97,3% tisztaságú ergoszterint és 6,9 mg, 99,2% tisztaságú ubikinon-9-et kapunk. 25 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás ergoszterin és ubikinon-9 élesztők biolipid-frakciójából történő egyidejű kinyerésére 30 pirogallol jelenlétében rövidszénláncú alkanolos alkálifémhidroxiddal történő hidrolízis, az el nem szappanosítható alkotórészek azt követő szerves oldószeres extrakciója és az ubikinon-9 alumíniumoxíd oszlopon adszorpciós kromatográfiával történő 35 elválasztása révén, azzal jellemezve, hogy az ergoszterint és az ubikinon-9-et termelő élesztőgombák, mint Candida-élesztő biomasszájából valamely szerves oldószerrel, előnyösen petroléterrel, n-hexánnal vagy acetonnal a zsíroldható komponenseket - a 40 biolipid-frakciót - elkülönítjük, majd az extrahálószert eltávolítjuk és a biolipid-frakció hidrolizálása után az extrakciót hidrofób szerves oldószerrel végezzük, az extraktumot az ergoszterin kristályok megjelenéséig bepároljuk, a bepárlás során kivált 45 ergoszterin kristályokat elválasztjuk az anyalúgtól, az anyalúgból eltávolítjuk az extrahálószernyomokat, majd az extrahálószer eltávolítása után visszamaradó olajos termékből az ubikinon-9-et az alumíniumoxid oszlopról petroléter és dietiléter ele- 50 gyével eluáljuk, majd izoláljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzá jellemezve, hogy a biolipid-frakció hidrolízisét metanolos káliumhidroxid-oldattá hajtjuk végre. 55 3. Az 1. és 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzá jellemezve, hogy hidrofób oldószerként dietilétert alkámazunk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 794508 - Zrínyi Nyomda, Budapest 4
