174279. lajstromszámú szabadalom • Eljárás zsírsavelegyek telítetlen zsírsavtartalmának növelésére ciklodextrin zárványkomplex-képzéssel
3 174279 4 elválasztják a vizes fázist. Ha ezt a forrási hőmérsékletre hevítik, akkor a komplex elbomlik, és lehűtés után a vizes fázis felszinén kiválik a szabad zsírsav, az alsó fázisban pedig kikristályosodik a ciklodextrin, amely a folyamathoz újra felhasználható. Az idézett szabadalmi leírásban nem történik említés a kivált szabad zsírsav-elegyek összetételének esetleges változásáról. A 2 241 869 számú Német Szövetségi Köztársaság-beli nyilvánosságrahozatali irat olyan eljárásra vonatkozik, amely szerint zsírsav elegyekből amilózzal komplexet képeznek, amikoris nagyobb hányad telített zsírsav megy komplexbe, mint telítetlen és így a komplexben a telített zsírsavak a visszamaradó, komplexbe nem ment zsírsavakban pedig a telítetlen zsírsavak dúsulnak fel. Például monopalmitin és monoolein 1 :1 arányú keverékét alkalmazva a milóz-zsírsavkomplex-képzésnél a komplexben a monopalmitin : monoolein aránya 3,1 : 1. A szóban forgó szabadalmi leírásból csak az amilózzal történő komplexképzés ismerhető meg. A zsírsavak amilózzal és (3-ciklodextrinnel alkotott zárványkompiexeinek előállítási körülményeit, a komplex összetételének meghatározására szolgáló módszereket és a komplexbe zárt zsírsavak stabilitását részletesen ismerteti az irodalom. [Die Stärke, 27, 368. (1975)] A (3-ciklodextrinnel végzett komplexképzésnél a hőmérséklet, a hőkezelési idő, a hűtési idő, és a |3-ciklo-dextrin-koncentráció változása nem eredményez számottevő változást a zsírsav beépülésben. A zsírsav-koncentráció az egyetlen paraméter, amelynek emelésével a 0-ciklodextrin-komplex zsírsav-tartalma növelhető (mintegy 10%-íg). Mi a komplexképzéssel kapcsolatos vizsgálatainkat kiterjesztettük a telített és telítetlen zsírsavak elegyeinek az összetétel változására is. Amilózzal végzett komplexképzésnél lényegében véve ugyanazt tapasztaltuk, mint amit a 2 240 869 számú Német Szövetségi Köztársaság-beli nyilvánosságrahozatali iratban már leírtak, nevezetesen azt, hogy a telített zsírsavak az amilóz-komplexben dúsulnak fel. A komplexképzést ciklodextrinnel végezve azonban meglepő módon azt figyeltük meg, hogy a ciklodextrin-komplexben a telítetlen zsírsavak dúsulnak fel és a dúsulás mértéke a telítetlenség mértékének a növekedésével növekszik. Ily módon jelentős mértékben növelhető a telítetlen zsírsavak aránya a zsírsav elegyekben. A telített és telítetlen zsírsavakat vegyesen tartalmazó növényi olajokat előnyösen úgy állíthatjuk elő, hogy a vizsgált növényi magvakat megdaráljuk, majd az őrleményt Soxhlet készülékben petroléterrel 8 órán át extraháljuk. Az oldószert bepárolva nyerjük az olajat. A kapott növényi olajból a zsírsav-keverékek előállítására 4—5 g-ot lemérünk, hozzáadunk 2,5—3,0 g kálium-hidroxidot és 25 ml 96%os etanolt, majd a keveréket egy órán át visszafolyó hütő alatt forraljuk. Még forrón hozzáöntünk 50—75 ml vizet a reakcióelegyhez majd metilnarancs indikátor jelenlétâren koncentrált sósavval a pH-t 2-re állítjuk. Lehűtés után az elegyet rázótölcsérben petroléterrel többször kirázzuk. Az egyesített petroléteres fázisokat telített konyhasó-oldattal (400 g nátnum-klorid 1000 ml térfogatra) savmentesre mossuk, majd a petrolétert lepároljuk. Az ily módon előállított zsírsav-keveréket egy későbbi gázkromatográfiás analízis lehetővé tételére etilészter -ke ver ékké alakítjuk. A komplex-képzés a szabad zsírsavakkal is hasonló módon végrehajtható [Die Stärke, 27, 368 (1975)]. A zsírsav-etilészterek előállítására 200—250 mg zsírsav-keverékhez 50 ml abszolút etanolt és néhány csepp tömény kénsavat adunk, majd összekeverés után 25 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk az elegyet. Ezután az elegyet 50 ml telített nátrium-klorid oldattal rázótölcsérben mossuk, majd több részletben petroléter-éter 1 :1 arányú elegyével kirázzuk, a felső szerves fázisokat összeöntjük, és az egyesített szerves fázisokat összeöntjük, és az egyesített szerves fázisokat telített nátrium-klorid-oldattal semlegesre mossuk. A savmentes oldatot nátrium-szulfáton keresztül szűrjük és bepároljuk. A zsírsavészter-/3-ciklodextrin komplex előállítása általában úgy történik, hogy 60-70 °C hőmérsékletű és 10% ciklodextrin-tartalmú vizes oldatot készítünk, amit nitrogénáram alatt mágneses keverővei kevertetünk. A megfelelő zsírsavészter elegyet általában 0,1 vagy 0,2 térfogatnyi szerves oldószerben oldjuk. A szerves oldószer minden esetben olyan, amely a vizes fázisból viszonylag könnyen kidesztillálható. A szerves oldószeres zsírsavészter-oldat hozzáadása után a reakcióelegyet elkezdjük hűteni, és nitrogénáramban négy óra alatt szobahőmérsékletre hütjük. A csapadékos elegyet ezután 15—18 órán át hűtőszekrényben tartjuk, majd üvegszűrőn szűrjük, kevés hideg éterrel (10 ml/1 g) mossuk és levegőn szárítjuk. A keletkezett zsír savészter-(3-ciklodextrin-komplex megbontására a komplex vizes oldatából (0,1 g/100 ml) éter és petroléter 1 :1 arányú elegyével extraháljuk a zsírsavésztereket, a vizes fázis nátrium-kloridos telítésével egyidejűleg. Az egyesített petroléter-éteres fázisokat nátrium-szulfáton szűrjük és bepároljuk. A kapott zsírsavészter-elegyet gázkromatográfiával analizáljuk. A kolonna hossza 1,75 m, átmérője 3 mm, a töltet 10% DEGS, (dietilénglikolszukcinát) a hordozó pedig Chromosorb W-sil 60/80 mesh (szililezett diatomaföld) szemcsemérettel (gyártó Japán Elektron Optikai Labor, Tokyo). A vivőgáz nitrogén és a detektálás lángionizációval történik. Az injektorblokk hőmérséklete 250 °C, a detektor hőmérséklete 230 °C. A kolonnatér hőmérséklete 150-210 °C között változik 2°C/perc hőmérséklet - -emelkedéssel. A kiindulási zsírsavészter, a (3-ciklodextrin komplexből visszanyert, és az anyalúgban maradt, illetve a komplex felületén adszorbeált, de éterrel lemosott és az anyalúggal egyesített zsírsavészterek összetételét gázkromatográfiásán a fentiek szerint meghatároztuk. A zsírsavészt er-/3-ciklodextrin-komplexek zsírsav-tartalma 9—10%, víztartalmuk pedig 7% körül van. A kitermelés (3-ciklodextrinre nézve (figyelembe véve, hogy a kiindulási (3-ciklodextrin víztartalma 13%, a komplexben pedig csak 7% a víz) 80-90%. A vizsgált körülmények között a zsírsavaknak a 40—45%-a épült be a komplexbe. A vizsgált zsírsavak jelölésére a következőkben az 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
