174263. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szerin proteázok meghatározására, valamint a meghatározáshoz használható kromogén enzim-szubsztrátok előállítására
MAGYAR népköztársaság SZABADALMI LEÍRÁS 174263 Nemzetközi osztályozás: Bejelentés napja: 1975. XI. 26. (BO-1586) G 01 N 31/14, C 07 C 103/52 Svédország-beli elsőbbsége: 1974. XII. 05. 74.15229-9) országos TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1979. V. 28. Megjelent: 1980. V. 31. 1 ■ — Feltalálok: Auieil Leif Erik vegyész, Mölndal, Claeson Kari Göran vegyész, Särö, Svédország Szabadalmas: Ab Kabi, Stockholm, Svédország Eljárás szerin proteázok meghatározására, valamint a meghatározáshoz használható kromogén enzim-szubsztrátok előállítására 1 A találmány tárgya eljárás a szerin proteázok meghatározására, valamint a meghatározáshoz használható új kromogén enzim-szubsztrátok előállítására. Ezek az új szubsztrátok különösen az úgynevezett Xa faktor (E. C. 3. 4. 21. 6) meghatá- 5 rozásához vagy az Xa faktor képződésével, fogyásával vagy gátlásával járó reakciók tanulmányozásához használhatók, továbbá olyan faktorok meghatározásához, amelyek az ilyen reakciókat befolyásolják vagy azokban részt vesznek. 10 Az X faktor a vér alvadásához vezető reakciósorozat kulcsvegyülete. Az X faktor aktiválása során egy proteolitikus enzim, az Xa faktor képződik, amely a protrombint közvetlenül trombinná 15 alakítja át. Az Xa faktor meghatározásának egyszerű módszere a diagnózis szempontjából igen fontos volna. Az Xa faktor meghatározásában eddig használt 20 szubsztrátok többnyire észterek, amelyek egyáltalán nem specifikusak. Ezek egyike, a p-nitrofenil-p’■guanidino-benzoát (n-NPGB) egyaránt jó szubsztrátuma a trombinnak, a tripszinnek és a plazminnek. Az Xa faktor meghatározásához csak tisztított en- 25 zim-készítményekben lehet használni. Ha a vér vizsgálatához használjuk, nem kapunk megbízható eredményt, mert a vérben más észt erázok is vannak, amelyek aktívak a p-NPGB-vel szemben. [R. L. Smith, J. Biol. Chem. 248. 2416 (1972)]. 30 2 A 380 257 sz. svéd szabadalmi leírás olyan amidokat ismertet, amelyek a trombinhoz hasonló enzimek igen jó kromogén szubsztrátjai. Ezek egyike, a benzoil-Phe-Val-Arg-p-nitroanilid (S—2160) igen jól reagál a trombinnal, az Xa faktor hatására azonban igen kis mértékben hasad. Egy olyan diagnosztikai szubsztrátnak, amelyet a vérvizsgálatban az Xa faktor meghatározására használnak, a trombinnal szemben elhanyagolható mértékű érzékenységet kell mutatnia. így az Xa faktorra specifikusabb, és a trombinnal való hasításnak jobban ellenálló szubsztrátra van szükség. A szubsztrátnak az enzim biológiai funkcióját, vagyis az amidkötés bontását kell mérnie. Kívánatos továbbá, hogy a szubsztrát gyorsan hasadjon, és a hasadás termékeit például kromofór sajátságuk révén könnyen meg lehessen határozni, ezáltal a bomlás spektrofotometriás úton követhető legyen. Azt találtuk, hogy az Rí - A! -A2 -Gly-Arg-NH-Rj általános képletű amid-típusú vegyületek és sóik, ahol R, hidrogénatomot, 1-4 szénatomos alkanoil-csoportot vagy benzoil-csoportot, R2 nitrofenil-, naftil- vagy metoxinaftil-csoportot jelent, A] jelentése egyszeres kötés vagy egy Gly-, Val-, Leu-, Deu-, Pro-, Phe- vagy Tyr-csoport, A2 jelentése egy Glu-, Gin-, Asp- vagy Asn-csoport, és valamennyi 174263
