174128. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alkálifém- vagy ammónium-inzulin tisztítására gélszűréssel
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS 174128 (|) Bejelentés napja: 1975. I. 30. (El—595) Nemzetközi osztályozás: C 07 C 103/52, A 61 K 37/26 ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1979. IV. 28. Megjelent: 1980. IV. 30.- r Feltalálók: Szabadalmas: Jackson Richard Lee vegyész, Stilz John George műszaki laboráns, Eli Lilly and Company, Indianapolis, Indianapolis, Indiana, Amerikai Egyesült Államok Indiana, Amerikai Egyesült Államok Eljárás alkálifém- vagy ammónium-inzulin tisztítására gélszűréssel 1 A találmány új eljárásra vonatkozik, amely alkalmas arra, hogy alkálifém- vagy ammónium-izulint 7,5-9,5 értékű pH-n gélszűréssel tisztítsunk. A találmány tárgya tehát eljárás alkálifém- vagy 5 ammónium-inzulin tisztítására, azzal jellemezve, hogy legfeljebb kb. 100 mikron szemcseméretű és száraz állapotban legalább kb. 4 súly% vízfel vevőképességű gélt duzzasztunk, a duzzasztott géllel oszlopot töltünk meg, az így kapott töltött 10 oszlopra legalább kb, 80%-os tisztaságú alkálifémvagy ammónium-inzulin olyan vizes oldatát öntjük, amelynek inzulin koncentrációja kb. 1— kb. 8súly%tf% és amelyben az inzulin összes mennyisége kb. 0,8 és kb. 6,7 g/liter ágytérfogat oszlop- 15 terhelést biztosít, mimellett az oldat kb. 7,5—9,5 pH-jú, majd az oszlopról az inzulint kb. 5 °C és kb. 30 °C közötti hőmérsékleten az inzulin oldatéval megegyező tartományba eső pH-értékű vizes oldattal eluáljuk. 20 Amióta 1921-ben a pankreász, azaz a hasnyálmirigy egyik alkotójaként az inzulint felfedezték, jelentősége a cukorbetegség, a diabetes mellitus gyógykezelésében világméretűvé vált. Minthogy pedig az inzulinnak a hasnyálmirigy szövetekből 25 történő kinyerésére alkalmazott kivonatoló eljárások az inzulinnal együtt jelentős mennyiségű nem-inzulin jellegű fehérjét is eltávolítanak, azóta is komoly erőfeszítések történnek az inzulin tisztítására, azaz az inzulin elválasztását a nem-inzulin 30 2 jellegű fehérjétől megoldó eljárások kidolgozására. Az inzulin tisztítására kifejlesztett módszerek közül számos eljárás vált ipari jelentőségűvé. Az egyik legkorábban kidolgozott ipari jelentőségű eljárás azon az általános jelenségen alapul, hogy ha minden egyéb tényező változatlan, úgy valamely fehérje oldékonysága az izoelektromos ponton a legkisebb. Banting és munkatársai az 1 469 994 lajstromszámú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban olyan eljárást írnak le, amelyben a hasnyálmirigy vizes kivonatában jelenlevő nem-inzulin fehérjéket izoelektromos pontjukon kicsapják. Az inzulin vizes hasnyálmirigy kivonatból kb. 4 és kb. 7 közötti pH-tartományban történő izoelektromos kicsapását pedig később Walden írta le az 1 520 673 lajstromszámú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban. Egy másik, ugyancsak régebbi módszernél az inzulin kicsapását elegendő mennyiségű szervetlen só hozzáadásával érik el. Az 1 547 515 lajstromszámú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban Muriin úja le az első eljárást az inzulin kisózására exktrakdós oldószerből nátrium-klorid hozzáadása útján. Differenciális kisózó eljárást írnak le Lautenschlager és munkatársai a 2449076 lajstromszámú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leúásban. Ezt az eljárást az jellemzi, hogy az inzulint semlegesített kivonatból nátrium-klorid hozzáadásával kisózzák, szűrik, a maradékot újra-174128
