173914. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ismert és új rifamicin-tipusú antibiotikumok előállítására
3 173914 4 d) - Burgonyakeményítő 20,0 g Ammónium-klorid 0,5 g Agar-agar 15,0 g Desztillált víz 1,0 liter 7. Zselatinos agar — Waksman, 1961. A 330. lapon található 20-as jelzésű táptalaj. 8. Tirozinos aga — Waksman, 1961. A 329. lapon található 11-es jelzésű táptalaj. 9. Szacharózos Czapek-agar Waksman, 1961. A 328. lapon található 1-es jelzésű táptalaj. 10. Burgonya szelet - Luedemann, G. M. és Brodsky, B., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1965. 47-52. lapok. 11. Burgonya szelet plusz CaC03 - Luedemann és Brodsky, 1965. 12. Sárgarépa darabok 13. Csapvízzel készített agar (2%) 14. Peptonkivonatos-vas agar — Waksman, 1961. A 332. lapon található 38-as jelzésű táptalaj. 15. Difco lefölözött tej. 16. 172-es ATCC táptalaj — ATCC Catalog of Strains (ATCC törzs katalógus), 9th Edition, 1970. 172. lap. 17. Dextróz-nitrát-húsleves — Waksman, 1961. A 328. lapon található 1-es jelzésű táptalaj. 18. Szerves nitrátos húsleves - Waksman, 1961. A 332. lapon található 37-es jelzésű táptalaj. 19. Szacharóz-invertáz — Levina, M és Schoenlein. H. W., A Compilation of Culture Media (Táptalaj gyűjtemény), 1930. A 176. lapon található 662-es jelzésű táptalaj. 20. Cellulóz - Levine és Schoenlein, 1930. A 823. lapon található 2511-es jelzésű táptalaj. 21. Cellulóz — Jensen, H. L., Proc. Linnean Soc. N. S. Wales 55, 231 (1930). 22. Nitrogén hasznosítás - Weinstein és munkatársai. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1968., 437. lap. 23. Szénhidrát hasznosítás — Weinstein és munkatársai. A hosszabb időtartamú tesztek céljaira a M. lacustris-t legalább két párhuzamos sorozatban kémcsövekbe vagy Petri-csészékben tenyésztettük. Eltérő megjelölés hiányában az inkubáltatást 28°C hőmérsékleten végeztük. Az észleléseket egészen a 14 napig terjedően, különböző időszakokban végeztük. egyes tesztek időtartama ennél is hosszabb volt. A szín megnevezések a Container Corporation of America, USA által kiadott „Color Harmony Manual”, 4th Edition, 1958-ban közölt színlapokra vonatkoznak, a leírásnál alkalmazott kifejezések azonban a vizsgáló személytől származnak. A teszteknél alkalmazott módszerek nagyjából megegyeznek az M. J. Weistein és munkatársai által az Antimicrobial Agents and Chemotherapy (1967/1968), 435—437. lapjain leírtakkal. Az M. lacustris ATCC 21975 törzset az alábbiakban írjuk le: A Micromonospora nemhez tartozó M. lacustris-ra jellemző, hogy légmicéliumai nincsenek. Spórákat csak a szubsztrátum micéliumon találunk és ezeket kizárólag gombafonalak hordozzák. A csapvizes agar táptalajon termelt spórák ritkák, végspórák, nyeleiknek, amelyek rendszertelen, többnyire 1, 1-1,5 mikron szélességű, némelykor 2,0 mikron szélességű tenyészetekben helyezkednek, rendeződnek el. Ritkán beágyazódott duzzanatokat találunk. Glükóz-élesztőkivonatos agar táptalajon a spórák hasonlók, némelykor azonban barnás foltok alakjában nagy számban találhatók a micéliumban. Az élesztőkivonatos és az NZ-amin A (Sheffield Chemival Co.) táptalajok jó növekedést biztosítanak. Nátrium-nitrátot, aszparagint és glutaminsavat nem alkalmazunk. A 172-es jelzésű ATCC táptalajon 21, 28 és 37°C-on a növekedés a gyengétől a jóig értékelhető, 45°C hőmérsékleten ellentmondásos. Nitrát-redukció: A nitrát redukciója nitritté 21 nap alatt sem a dextróz-nitrátos húsleves, sem a szerves nitrátos húsleves táptalajon nem fordul elő. Kénhidrogén-fejlődés: (4 nap, ólom-acetáttal impregnált szalagos teszt) - peptonkivonatos-vas agar táptalajon kénhidrogén fejlődés. Cellulóz: Növekedés még 38 nap után sem észlelhető egyik táptalajon sem. Zselatinos agar: Zselatin emésztés. Keményítős agar: Nincs hidrolízis a 6a és 6b táptalajokon, de jó hidrolízis észlelhető a 6c és 6d táptalajokon. Szacharóz invertálás: pozitív Lefölözött tej: 21 nap alatt nincs változás, később alvadás és részleges peptonizálás lép fel. Szénhasznosítás: pozitív hasznosítás - glükóznál, galaktóznál, fruktóznál, D-mannóznál, d(—) ribóznál, keményítőnél, szacharóznál, trehalóznál és xilóznal: nincs hasznosítás adonit, L-arabinóz, cellulóz, dulcit, inozit, D-mannit, raffinóz, rammóz és d(—) szorbit esetében: változó hasznosítás — a laktóz és a D-melibióz esetében. A M. lacustris ATCC 21975 tenyészeti jellemzőivel kapcsolatos további adatokat a következő táblázatban ismertetünk: A M. lacustris ATCC 21975 egy általunk előállított mutáns törzsét (Pfizer F. D. 24189) ATCC 21974 jelzéssel helyeztük letétbe az American Type Culture Collenction-nál. A mutáns törzs színe a glükóz-élesztőkivonatos agar plusz kálium-karbonát táptalajon és más táptalajokon is fakóbb az anyatörzs tenyészeténél. A mutáns törzs az anyatörzsnél több és kissé nagyobb spórát termel. A mutáns törzs az anyatörzzsel ellentétben nem képes szénforrásként fruktózt és laktózt hasznosítani. A mutáns törzs az alkalmazott fermentációs táptalajokban az anyatörzshöz képest kisebb mennyiségekben termel rifamicin S-t és rifamicin SV-t. A M. lacustris törzsek tenyésztését előnyösen vizes táptalajban, kb. 24—36°C hőmérsékleten, süllyesztett aerob fermentációs körülmények és keverés közben végezzük. Az e célra alkalmas táptalajok asszimilálható szénforrást, így például cukrokat, keményítőt, glicerint és melaszokat, szerves nitrogénforrást, így például kazeint, enzimmel emésztett kazeint, húslisztet, búza síkért, gyapotlisztet, szójalisztet és földimogyoró lisztet tartalmaznak. Jó eredményekkel alkalmazhatjuk a növekedéshez szükséges anyagok egyik forrásaként például a szeszfőzdék cefréjét és/vagy az élesztőkivonatokat, valamint a különböző sókat, így például a nátrium-kloridot, ammónium-acetátot, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
