173783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nonapeptidaminok előállítására
19 173783 20 sósavval, 4%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, majd vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. Ezután csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, és a maradékot petroléterrel kezeljük. A kapott 5 por alakú terméket etilacetát-petroléter elegyből végzett bepárlással tisztítjuk. Hozam: 718 mg. [°t]j,5= —51,0° (c = l,0, metanolban), Rf* = 0,64. Elemzési eredmények C33H53O8N9 összegképlet 10 alapján: számított: C = 56,23%, H = 7,58%, N = 17,89%, talált: C =56,14%, H =7,70%, 15 N = 17,58%. b) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-D-Nva-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH2-CH3 előállítása 20 3 ml 25%-os hidrogénbromid-jégecet elegyben feloldunk 500 mg Z-D-Nva-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2-CH2-CH3-t és az oldatot 50 percen át rázzuk. Ezután hozzáadunk 60 ml száraz étert, a kelet- 25 kező csapadékot szűréssel kinyerjük, és 40 ml vízben feloldjuk. Az oldatot 14 cm hosszú, 1 cm átmérőjű Amberlite CG—410 (szabad bázis) oszlopon visszük keresztül, amelyet ezután 30%-os vizes metanollal mosunk. Az elfolyó oldatot és a 30 mosófolyadékokat összegyűjtjük és a metanolt csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot liofilizálva 320 mg H-D-Nva-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2-CH2-CH3-t kapunk (szabad bázis). A fenti termék 225 mg-ját 2 ml dimetilformamidban fel- 35 oldjuk 280 mg (Pyr(Glu-His-Trp-Ser-Phe-OH-val együtt, majd hozzáadunk 230 mg HONB-t. Az elegyet —10°C-ra hűtjük, és hozzáadunk 87 mg DCC-t. Az elegyet 3 órán át -10°C-on, 2 órán át 0 °C-on és 6 órán át szobahőmérsékleten keverjük. 40 Ehhez a reakcióelegyhez hozzáadunk 40 ml etilacetátot és a keletkező csapadékot szűréssel kinyerjük, és melegítés közben feloldjuk 30%-os vizes etanolban. Az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük, és a szűrletet lehűtjük, ekkor csapadék válik le. A 45 csapadékot szűréssel kinyerjük, hideg vízzel mossuk és szárítjuk. Hozam: 340 mg az Arg-csoporton védett cím szerinti vegyidet. A fenti termék 300 mg-ját feloldjuk 20 ml 60%-os vizes hangyasavban, majd hozzáadunk 580 mg ónklorid-monohid- 50 rátot (SnCl2 • H2 O). Az elegyet 2 órán át melegítjük 85 °C-on. Ezután csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, és meleg vízzel extraháljuk. Az extraktumot Amberlite XAD—2, karboxi- 55 metilcellulóz és Biogel P-2 oszlopon végzett kromatografálással tisztítjuk. Ily módon 170 mg dm szerinti terméket kapunk. [a]pS--37,75 (c = 0,505, 5%-os vizes ecetsavban), Rf2= 0,13, Rf3=0,76. 60 Aminosav analízis (6 n sósavval tioglikolsav jelenlétében végzett hidrolízis): His 1,02, Arg 0,98, Trp 0,97, Ser 0,98, Glu 1,02, Pro 1,00, Leu 1,00, Nva 1,02, Phe 0,98. 65 (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Abu-Leu-Arg-Pro-NH-CH(CH3 )2 előállítása a) Z-D-Abu-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH(CH3 )2 előállítása 3 ml 25%-os hidrogénbromid-jégecet elegyben feloldunk 700 mg Z-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH(CH3)2-t, és az oldatot 60 percen át keverjük, majd hozzáadunk 50 ml száraz étert, a keletkező csapadékot szűréssel kinyerjük és szárítjuk. A száraz terméket 6 ml dimetilformamidban feloldjuk. Ehhez az oldathoz hozzáadunk 240 mg Z-D-Abu-OH-t és az oldatot 0,15 ml trietUaminnal semlegesítjük. Ezután hozzáadunk 200 mg HONB-t, az elegyet 0 °C-ra hűtjük, majd hozzáadunk 230 mg DCC-t. Az elegyet 6 órán át keverjük szobahőmérsékleten. Ezután hozzáadunk 100 ml etilacetátot, és az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük. A szürletet 0,5 a sósavval és 4%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk, majd vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. Ezután csökkentett nyomáson szárazra pároljuk és éterrel kezeljük. A keletkező por alakú terméket etilacetát-éter elegyből újra lecsapjuk. Hozam: 725 mg cím szerinti vegyidet. [a]j)S= —52,0° (c = 0,5, metanolban), Rf' = 0,62. Elemzési eredmények C32H5i08N9 összegképlet alapján: számított: C = 55,71%, H = 7,45%, N = 18,27%, talált: C = 55,42%, H = 7,59%, N = 18,01%. b) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Abu-Leu-Arg-Pro-NH-CH(CH3)2 előállítása Az 5. példa szerinti módon járunk el kiindulási anyagként az a) lépésben kapott Z-D-Abu-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH(CH3 )2 -t és (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH-t használva. [a]^é= —41 ß° (c = 0,62, 5%-os vizes ecetsavban), Rf2 = 0,11, Rf = 0,74. Aminosav analízis (6 n sósavval tioglikolsav jelenlétében végzett hidrolízis): His 1,00, Arg 0,90, Trp 0,87, Ser 0,97, Glu 1,00, Pro 0,94, Abu 1,00, Leu 1,02, Tyr 0,96. 9. példa 10. példa (Pyr)Qu-His-T rp-Ser-Tyr-D- Leu-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása szilárd fázisú módszerrel a) BOC-Pro-gyanta előállítása 50 ml dimetilformamidba bemérünk 15 g klórmetüezett gyantát (klór-tartalom 9,45 millimól), majd hozzáadunk 6,1 g BOC-Pro-OH-t és 3,33 írd trietilamint. Az elegyet 5 napon át rázzuk. Ezután a gyantát szűréssel kinyerjük és dimetilformamiddal, etanollal, vízzel, etanollal és éterrel ebben 10
