173783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nonapeptidaminok előállítására
21 173783 22 a sorrendben mossuk és szántjuk. Hozam: 17,55 g cím szerinti gyanta. Az aminosav analízis azt mutatja, hogy ez a gyanta 1 g-ra BOC-Pro-ra számítva 0,314 millimólt tartalmaz. b) (Pyr)Glu-His(Tos)-Trp-Ser(Bzl)-Tyr(Bzl)-D-Leu-Leu-Arg(Tos)-Pro-gyanta előállítása Automatikus peptid-szintetizáló készülék (Simadzu Seisakusho Model APS-800) reakcióedényébe bemérünk 3,145 g, a) lépésben kapott BOC-Pro-gyantát. A gyantát 12 órán át duzzasztjuk diklórmetánban, majd az aminosavat az alábbi ciklusban alakítjuk ki: Diklórmetán (3-szor 3 perc -* 50%-os trifluorecetsavjdiklórmetán (10 perc és 30 perc) ->■ diklórmetán (3-szor 3 perc) ->■ etanol (3-szor 3 perc -»■ diklórmetán 13-szor 3 perc) -+ 10%-ostrietilamin/kloroform (10 perc)kloroform (3-szor 3 perc) -*■ diklórmetán (2-szer 3 perc) -*■ BOC-aminosav-anhidrid (BOC-aminosavból és DCC-ből ismert módon előállítva) (30 perc és 60 perc) -»■ acetilezés (diklórmetán, trietilamin és ecetsavanhidrid) (1 óra) -> diklórmetán (3-szor 3 perc ) [(Pyr)Glu-OH-t egyedül közvetlenül kondenzálunk DCC-vel dimetilformamidban]. Végül a gyantát etanollal, kloroformmal, dimetilformamiddal és éterrel mossuk és szárítjuk. Hozam: 3,89 g cím szerinti gyanta. c) (Pyr)Glu-His(Tos)-Trp-Ser(Bzl)-iyr(Bzl)-I>Leu-Leu-Arg(T os)-Pro-NH-CH2-CH3 előálUtása A b) lépésben kapott gyanta 3,52 g-ját 20 ml metanolban szuszpendáljuk, és a szuszpenziót 20 °C-ra hűtjük. 80%-os vizes etilamint meleg vízfürdőben melegítünk, a kapott etilamint nátriumhidroxidon keresztül a szuszpenzióba buborékoltatjuk. Elegendő telítettség elérése után az elegyet 40 órán át keverjük szobahőmérsékleten. Azután a gyantát szűréssel kinyerjük, és a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot éterrel kezeljük, így 835 mg nyers, por alakú terméket kapunk. Ez a nyerstermék nagy mennyiségű szennyezést tartalmaz, ami valószínűleg metilészter. Ezért a termék 503 mg-ját feloldjuk 8 ml metanol és 8 ml dimetilformamid elegyében, és a fenti módon etilamint buborékoltatunk az oldatba. Az oldatot 34 órán át keverjük, így a metilészter eltűnik. Ezután az oldatot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, és a maradékot éterrel kezeljük. A keletkező por alakú terméket szűréssel kinyerjük. Hozam: 465 mg cím szerinti vegyidet. d) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NH-CHj-CHs előálUtása 0,4 ml anizd és 0,4 ml 2-merkapto-etanol jelenlétében 327,8 mg, oj lépésben kapott nyersterméket feloldunk 8 ml vízmentes hidrogénfluoridban. Az oldatot 1 órán át keverjük 0 °C-on, majd csökkentett nyomáson szárazra pároljuk A maradékot feloldjuk 20 ml vízben, és az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük. A szürletet 1,5 cm átmérőjű, 20 cm hosszú Amberlite IRA-410 (acetát alak) oszlopon bocsátjuk keresztül, majd karboximetilcellulóz és Amberlite XAD—2- oszlopon végzett kromatografálással tisztítjuk. Végül a terméket gélszűrésnek vetjük alá Sephadex LH -20 oszlopon, így 98 mg cím szerinti terméket kapunk. [a]n6=-32,0° (c = 0,52, 5%-os vizes ecetsavban): Rf - 0,10, Rf3= 0,75. Aminosav analízis (6 n sósavval tioglikolsav jelenlétében végzett hidrolízis): His 0,98, Arg 1,00, Trp 0,87, Ser 0,90, Glu 1,02, Pro 1,02, Leu 2,01, Tyr 0,98, etilamin 1,10. 11. példa (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Nle-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása a) BOC-D-Nle-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 10 ml dimetilformamidban feloldunk 346 mg BOC-D-Nle-OH-t és 820 mg H-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2-CH3-t. Az elegyet 0°C-ra hűtjük, majd hozzáadunk 322 mg HONB-t és 371 mg DCC-t. Az elegyet 2 órán át 0 °C-on és éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. A melléktermékként képződött diciklohexil-karbamidot szűréssel" eltávolítjuk, és a szűrletet 10 ml kloroformmal extraháljuk. Az extraktumot 0,1 n sósavval, 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, majd vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. A kloroformot lepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük és etanol-éter elegyből újra kicsapjuk, így 811 mg cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspont: 124-126 °C (bomlás). [a]p2=-46,2° (c = 0,5, metanolban). Elemzési eredmények C30H5 5O8N9 • 1/2H20 összegképiét alapján: számított: C =53,08%, H =8,31%, N = 18,57%, talált: C =53,07%, H =8,27%, N = 19,05%. b) (Pyr)Qu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Nle-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 előálUtása A fenti a) lépésben kapott BOC-D-Nle-Leu-Arg(N02>Pro-NH-CH2-CH3-at trifluorecetsawal kezeljük, éténél lecsapjuk és szűréssel kinyerjük. A terméket a trifluorecetsav eltávoUtása céljából Amberlite CG-45 (szabad bázis) oszlopon bocsátjuk keresztül. 2 ml dimetilformamidban feloldunk 190 mg H-D-Nle-Leu-Arg(N02 >Pro-NH-CH2 -CH3 -t és 168 mg (Pyr)Glu-Hos-Trp-Ser-Tyr-OH-t. Az elegyet 0 °C-ra hűtjük, majd hozzáadunk 65 mg HONB-t és75 n% DCC-t. Az elegyet 2 órán át 0 °C-on és éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. A melléktermékként képződött diciklohexil-karbamidot szűréssel eltávoUtjuk, és a szűrlethez etilacetátot adunk. A 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
