173783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nonapeptidaminok előállítására
17 173783 18 Z-D-Abu-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2 CH3Jt 25%-os, jégecettel készített hidrogénbromid-oldattal kezelünk és éterrel kicsapjuk. A csapadékot Amberlite CG—410 (szabad bázis) oszlopra visszük a hidrogénbromid eltávolítása céljából. 3 ml dimetilformamidban feloldjuk az így kapott H-D-Abu-Leu-Arg{N02 >Pro-NH-CH2 -CH3 szabad bázis 220 mg-ját és 290 mg (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH-t, majd hozzáadunk 150 mg HONB-t. Az elegyet —10 °C-ra hütjük, és hozzáadunk 85 mg DCC-t. Az elegyet 2 órán át —10°C-on, 4 órán át 0 °C-on és 7 órán át szobahőmérsékleten kevejjük. A reakcióelegyhez etilacetátot adunk, és a keletkező csapadékot szűréssel lenyeljük. A csapadékot 20%-os vizes metanolban melegítés közben feloldjuk, majd az oldatot lehűtjük, ekkor csapadék válik le. A csapadékot szűréssel kinyerjük és szárítjuk. Hozam: a cím szerinti vegyület Pyr-csoporton N02-csoporttal védett származékának 284mg-ja. Rf2= 0,240, Rf3 =0,772. (Mindkét oldószerben a termék körülbelül 10% szennyezést tartalmaz, amely kis - Rf-ért éknél jelenik meg-) 15 ml 60%-os vizes hangyasavban feloldjuk a fenti termék 200 mg-ját, majd hozzáadunk 400 mg ónklorid-monohidrátot (SnCl2 • H20). Az elegyet 80—85 °C-on melegítjük 2 órán át. Ezután csökkentett nyomáson szárazra pároljuk és a maradékot 50 ml meleg vízzel extraháljuk. Az oldhatatlan anyagokat szűréssel eltávolítjuk, és a szűrletet Amberlite XAD-2 metilcellulóz és Sephadex LH-20 oszlopon bocsátjuk keresztül az említett sorrendben, majd liofilizáljuk. így 104 mg cím szerinti terméket kapunk fehérszínű pelyhes por alakjában, [a]^4 = -43,6° (c = 0,50, 5%-os vizes ecetsavban), Rf2=0,08. Aminosav analízis (6 n sósavval tioglikolsav jelenlétében végzett hidrolízis): His 0,98, Arg 0,96, Trp 0,94, Ser 0,92, Glu 1,00, Pro 1,00, Leu 0,98, Abu 1,00 Tyr 1,00, etilamin 1,02. b) (Pyrl(Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Abu-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 7. példa (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Nva-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása a) Z-D-Nva-OH előállítása H-D-Nva-OH-t 2 n nátriumhidroxidban a szokásos módon benziloxikarbonil-kloriddal reagáltatunk, és a kapott vegyületet etilacetát-petróleum-benzin elegyből átkristályosítjuk. A cím szerinti terméket tűk alakjában kamuk, amelyek 83-84 °C-on olvadnak. [a]p=+12,1“ (c=l,0, metanolban). Elemzési eredmények CisH^C^N összegképlet alapján: számított: C = 62,14%, H = 6,82%, N = 5,57%, talált: C =62,17%, H =6,88%, N = 5,62%. b) Z-D-Nva-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 5 ml dimetilformamidban féld dunk 376 mg Z-D-Nva-OH-t, 685 mg H-Leu-Arg(N02>Pro-NH-CH2-CH3-t és 295 mg HONB-t, majd 0 °C-on hozzáadunk 340 mg DCC-t. Az elegyet 2 órán át 0°C-on, és 8 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A melléktermékként képződött diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, és a szűriethez 100 ml etilacetátot adunk. Az elegyet 0,5 n sósavval és 4%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk. Vízzel való mosás után vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. Az oldatot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, és éterrel kezeljük. A keletkező por alakú terméket szűréssel kinyerjük, és etilacetát-éter elegyből végzett bepárlással tisztítjuk. Hozam: 900 mg cím szerinti vegyület, dvadáspont: 105-107 °C (bomlás), [a&6 =-51,2° (c = l, metanolban), Rf'= 0,60. Elemzési eredmények C32HSi08N9 összegképlet alapján: számított: C =55,71%, H =7,45%, N = 18,27%, talált: C =55,54%, H =7,62%, N = 18,09%. c) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Nva-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása A 6. b) példa szerinti módon járunk el és a fenti b) lépésben kapott Z-D-Nva-Leu-Arg(N02> Pro-NH-CH2 -CH3 -ból és (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr- OH-ból indulunk ki, így a cím szerinti vegyületet íapjuk. [o]n5= -39,8° (c = 0,51, 5%-os vizes ecetjavban), Rf - 0,094, Rf3= 0,74. Aminosav analízis (6 n sósavval tioglikolsav jelenlétében végzett hidrolízis): His 1,00, Arg 0,98, Trp 0,93, Ser 0,94, Glu 1,08, Pro- 1,02, Nva 0,98, Leu 1,00, Tyr 0,98, etilamin 1,04. 8. példa (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-D-Nva-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH2 -CH3 előállítása a) Z-D-Nva-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 - -CH2-CH3 előállítása 2 ml 25%-os hidrogénbromid-jégecet elegyben feloldunkJ720 mg Z-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH2 - -CH3-t és az oldatot 40 percen át rázzuk. Ezután hozzáadunk 20 ml száraz étert és a keletkező csapadékot szűréssel kinyerjük. Ezután száraz éterrel jól kimossuk és nátriumhidroxid felett csökkentett nyomáson exszikkátorban szárítjuk. Megpzáradás után a terméket feloldjuk 5 ml dimetilformamidban és hozzáadunk 250 mg Z-D-Nva-OH-t, majd 0,15 ml trietilamint és 200 mg HONB-t. Az elegyet 0°C-ra hűtjük és hozzáadunk 230 mg DCC-t, majd 8 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután hozzáadunk 80 ml etilacetátot és az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük. A szűrletet n 5 10 13 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
