173783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nonapeptidaminok előállítására
15 173783 16 190 ml-240 ml frakciókban jelenik meg. Az eluátumot csökkentett nyomáson betöményítjük és liofilizáljuk. Ily módon 110 mg cím szerinti terméket kapunk. Rf2 = 0,098, Rf3=0,73. Md4= -57,0° (c = 0,56, 5%-os vizes ecetsavban). Aminosav analízis (6 n sósavval tioglikolsav jelenlétében végzett hidrolízis): His 0,96, Arg 1,04, Trp 0,92, Ser 0,93, Glu 1,00, Pro 1,00, Leu 1,01, Híg 0,98, Tyr 1,01. 5. példa (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása a) Z-D-Ser-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 10 ml dioxán és 10 ml dimetilformamid elegyében feloldunk 955 mg Z-D-Ser-OH-t, 1,82 g H-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3-t és 788 mg HONB-t. Az oldatot 0 “C-ra hűtjük, és hozzáadunk 907 mg DCC-t. Az elegyet 2 órán át 0 °C-on és 5 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A melléktermékként képződő diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, és a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 100 ml kloroformban feloldjuk. Az oldatot 0,5 n sósavval és 4%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk az említett sorrendben, vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot petroléterrel kezeljük, a keletkező por alakú terméket szűréssel kinyerjük, és etanol-éter elegyből bepárlással kicsapjuk. Hozam 2,4 g cím szerinti vegyület, olvadáspont 123-126 °C (bomlás): [aß7 = -49,8° (c = 0,5, metanolban). Elemzési eredmények C3 0 H4 7 09 N9 • H2 O összegképlet alapján: számított: C =51,79%, H = 7,09%, N = 18,12%, talált: C =52,01%, H = 6,96%, N = 18,04%. Rf1 = 0,40. b) (Pyr)Gl u-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 20 ml metanol és 1 ml jégecet elegyében feloldunk 334 mg Z-D-Ser-Leu-Arg(N02>Pro-NH-CH2- -CH3-t és palládium-szivacs katalizátort hozzáadva katalitikus redukciót végzünk 4 órán át szobahőmérsékleten és atmoszférikus nyomáson. A katalizátort kiszűrjük, és a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 9,6 ml 0,1 n sósav hozzáadásával feloldjuk és liofilizáljuk. A száraz port és 280 mg (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH-t feloldunk 3 ml dimetilformamidban, és hozzáadunk 100 mg 1 -hidroxibenztriazolt és 0,615 ml 10%-os, dimetilformamiddal készített N-etil morfolin-oldatot. Az elegyet -5 °C-ra hűtjük, hozzáadunk 165 mg DCC-t. Az elegyet 4 órán át —5 °C-on és 8 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A melléktermékként képződött diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 20 ml vízben feloldjuk, és az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük. A szűrletet acetát alakban levő Amberlite IRA—410 oszlopon (10 ml) futtatjuk, az elfolyó oldatot és a mosófolyadékokat összegyűjtjük és 27 cm hosszú, 1,5 cm átmérőjű karboximetilcellulóz oszlopon futtatjuk. Az eluálást gradiens módszerrel végezzük 0,005 mól ammóniumacetát-puffert (300 ml) és 0,15 mól ammóniumacetát-oldatot (300 ml) használva. A kívánt termék a 280 ml-322 ml frakciókban jelenik meg. Ezeket a frakciókat összegyűjtjük és liofilizáljuk, így 135 mg nyersterméket kapunk. Ezt kis mennyiségű vízben feloldjuk, és 17 cm hosszú, 1,5 cm átmérőjű Amberlite XAD—2 oszlopra visszük fel. Az eluálást gradiens módszerrel végezzük 5%-os vizes etanolt (300 ml) és 60%-os vizes etanolt (330 ml) használva. A 196ml-231ml frakciókat összegyűjtjük és az etanol desztillációval történő eltávolítása után liofilizáljuk. Hozam: 62 mg cím szerinti vegyület. Ezt a terméket feloldjuk 0,1 n vizes ecetsavban és gélszűrésnek vetjük alá 54 cm hosszú, 1 cm átmérőjű Sephadex LH— 20 oszlopon. Liofilizálás után 40 mg kívánt, tiszta cím szerinti vegyületet kapunk. [aß7 =—46,4° (c = 0,5, 5%-os vizes ecetsavban), Rf2 =0,055, Rf3= 0,70. Aminosav analízis (6 n sósavval tioglikolsav jelenlétében végzett hidrolízis): His 1,00, Arg 1,04, Trp 1,00, Ser 1,81, Glu 1,00, Pro 1,00, Leu 1,04, Tyr 0,96, etilamin 1,04. 6. példa (Pyr)Glu-Hos-Trp-Ser-Tyr-D-Abu-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása a) Z-D-Abu-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 5 ml dimetilformamidban feloldunk 0,3 g Z-D-Abu-OH-t és 0,45 g H-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2-CH3-t. Az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és hozzáadunk 0,25 g HONB-t és 0,29 g DCC-t. Az elegyet 1 órán át keverjük 0 °C-on és 5 órán át szobahőmérsékleten. A melléktermékként keletkező diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, és a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 80 ml kloroformban feloldjuk, n sósavval és 4%-os vizes nátriumhidrog énkarbonát-oldattal mossuk. Vízzel való mosás után vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot éterrel kezeljük, a keletkező por alakú terméket szűréssel, elválasztjuk, és etilacetát-petróleum-benzin elegyből bepárlással kicsapjuk. Hozam: 489 mg cím szerinti vegyület, olvadáspont: 111-114 °C. [aß6 =-51,2° (c = 0,6, metanolban), Rf 1 = 0,66. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
