173783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nonapeptidaminok előállítására
13 173783 14 eltávolítjuk, és a metanolt csökkentett nyomáson azonnal ledesztilláljuk. A maradékot feloldjuk 25 ml dimetilformamidban, és hozzáadunk 4,1 g kristályos (Pyr)Glu-His-Trp-OH-t. Az elegyet -5 °C-ra hűtjük, majd hozzáadunk 3,8 g HONB-t és 3 g DCC-t. Az elegyet 2 órán át keveijük -5°C-on 2 órán át 0 °C-on és végül 8 órán át szobahőmérsékleten. A melléktermékként képződött diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, és a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot etilacetáttal kezeljük, és a kapott por alakú terméket szűréssel kinyerjük (6,7 g). Ezt a port 30 ml 15%-os metanolos kloroformban feloldjuk, és az oldatot 15%os metanolos kloroformmal készített 12 cm hosszú és 6 cm átmérőjű szilikagél oszlopon futtatjuk. Az eluálást 600 ml 15%-os metanolos kloroformmal, 1 liter 25%-os metanolos kloroformmal és 1 liter 30%-os metanolos kloroformmal végezzük. A 400 ml 25%-os metanolos kloroform és 700 ml 30%-os metanolos kloroform közötti frakciókat összegyűjtjük, és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot etilacetáttal kezeljük, és a keletkező por alakú terméket szűréssel kinyerjük. Ily módon a cím szerinti termék metilészterének 4,2 g-nyi mennyiségét kapjuk. Rf2=—29. 20 ml metanolban a fenti metilészter 3,5 g-ját szuszpendáljuk, és 0 °C-on hozzáadunk 8 ml n nátriumhidroxid-oldatot. Az elegyet egy órán át keveijük, majd 8 ml n sósav hozzáadásával semlegesítjük. A metanolt csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, és hozzáadunk 20 ml hideg vizet. A keletkező csapadékot szűréssel kinyerjük, lehűtött vízzel, majd etanol-éter eleggyel (4 :6) mossuk és szárítjuk. Ily módon 2,32 g cím szerinti terméket kapunk. [a]|j6>5= 3,3° (c = 0,55, jégecetben), Rf - 0,61. b) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása 4 ml dimetilformamidban feloldunk 290 mg (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-OH-t és 228 mg H-D-Leu-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 -t, majd hozzáadunk 140 mg HONB-t. Az elegyet -10°C-ra hűtjük, majd hozzáadunk 90 mg DCC-t. Az elegyet 2 órán át keveijük —10°C-on, 3 órán át 0 °C-on és végül 5 órán át szobahőmérsékleten.- Ezután a re akció elegyet az 1. példa szerinti módon oszlopkromatografálásnak vetjük alá Amberlite XAD-2 oszlopon. Az ott leírt eljárással 342 mg az Arg-csoporton N02 -csoporttal védett terméket kapunk. [a]pS=—41,74° (c = 0,115, metanolban), Rf2= 0,265, Rf3= 0,78. 20 ml 60%-os vizes hangyasav-oldatban feloldunk 300 ml fenti terméket, majd hozzáadunk 600 mg ónklorid-monohidrátot (SnCl2 • H2 0). Az elegyet 2 órán át 80-85 °C-on állni hagyjuk, majd csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. Ezután a koncentrátumot Amberlite XAD—2 és karboximetilcellulóz oszlop segítségével az 1. példa szerinti módon tisztítjuk. Dy módon 211 mg cím szerinti vegyületet fehérszínű pelyhes por alakjában. [a]J,4= -38,49° (c = 0,53 5%-os vizes ecetsavban), Rf -0,12, Rf3=0,74. Aminosav analízis (6 n sósavval tioglikolsav jelenlétében végzett hidrolízis): His 1.00, Arg 1,04, Trp 0,98, Ser 0,92, Glu 1,00, Pro 1.00, Leu 1,04, Phe 1,00, Tyr 0,98. 4. példa (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Phg-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása a) Z-D-Phg-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 10 ml dimetilformamid és 20 ml diklórmetán elegyében feloldunk 580 mg Z-D-Phg-OH-t és 1,14 g H-Leu-Arg((N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 -t. Az elegyhez hozzáadunk 400 mg HONB-t és jeges hűtés közben 500 mg DCC-t. Az elegyet 4 órán át keverjük szobahőmérsékleten. A melléktermékként képződött diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot feloldjuk 100 ml etilacetátban. Az oldatot 4%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk, és az etilacetát elpárologtatása céljából desztilláljuk. A maradékot etilacetát-petroléter elegyből bepárlással lecsapjuk, így 1,4 g por alakú cím szerinti vegyületet kapunk, Rf^0,65, Rf2=0,83. [or]^,5= -80,2° (c = 0,5, metanolban). b) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Phg-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása 20 ml ecetsavban feloldunk 150 mg Z-D-Phg-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 -t. Hozzáadunk 100 mg palládium feketét és atmoszférikus nyomáson hidrogéngázt buborékoltatunk át az oldaton. 4 óra múlva a katalizátort kiszűrjük, és hozzáadunk 0,4 ml n sósavat. Az oldatot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, és a maradékot feloldjuk 20 ml vízben és liofilizáljuk. A keletkező por alakú terméket feloldjuk 8 ml dimetilformamidban, és cseppenként hozzáadunk 0,25 ml 10%-os, dimetilformamiddal készített N-etilmorfolin-oldatot. Ezután hozzáadunk 141 mg (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH-t, majd 50 mg 1-hidroxibenztriazolt és —5 °C-on 40 mg DCC-t. Az elegyet 2 órán át -5 °C-on, 2 órán át 0 °C-on és 8 órán át szobahőmérsékleten keveijük. Ezután a reakcióelegyhez étert adunk, a keletkező csapadékot szűréssel kinyerjük és 20 ml vízben feloldjuk. Az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük, a szűrletet acetát alakban levő Amberlite IRA-410 oszlopon visszük keresztül, amelyet ezután vízzel mosunk. Az elfolyó oldatot és a vizes mosófolyadékokat összegyűjtjük, 1,5 cm átmérőjű, 25 cm hosszú és karboximetilcellulóz oszlopon futtatjuk, és gradiens eluálást végzünk 0,005 mól ammóniumacetát-oldatot és 0,175 mól ammóniumacetát-oldatot (pH 6,8) használva (mindegyik 300 ml). A kívánt termék a 170ml-240ml frakciókban jelenik meg. Ezeket a frakciókat összegyűjtjük, és 2 cm átmérőjű és 20 cm hosszú Amberlite XAD—2 oszlopon futtatjuk. A kívánt, adszorbeált vegyületet gradiens módszerrel eluáljuk vizet (250 ml) és etanolt (280 ml) használva, a tiszta vegyület a 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
