173662. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ovulációt serkentő új nonapeptidamid-származékok előállítására
19 173662 20 (szemcsemérete közei zOO mesh) gyantából készült oszlopra fel visszük, az oszlopot pedig vízzel mossuk és gradiens-módszerrel eluáljuk 300 ml vízzel és 300 ml 100%-os etanollal. A kívánt vegyület a 130 ml és 220 ml közötti frakciókban jelenik meg, amelyeket összeöntünk és az etanol eltávolítása céljából csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 2 cm átmérőjű és 30 cm hosszú, karboximetil-cellulózból készült oszlopra felvisszük. Az oszlopot gradiens-módszerrel eluálásnak vetjük alá 0,005 mól és 02 mól (pH = 6,8) közötti koncentrációjú ammónium-acetát-oldatokkal. A kívánt vegyület a 350 ml és 500 ml közötti frakciókban jelenik meg, melyeket összeöntünk és liofilizálunk, amikor is 112 mg pelyhes csapadékot kapunk cím szerinti vegyületként. Fajlagos forgatóképesség [a]p4=-44,3° (c = 0,53, 5%os vizes ecetsavban). Rf^ 0,088, Rf2= 0,73. Aminosav-elemzés: His = 0,96, Arg = 1,04, Trp = 0,92, Ser = 0,96, Glu = 0,99, Pro =1,08, Ala = 1,00, Leu = 1,00, Phe = 1,00, etil-amin = 1,04 (85%-os átlagos visszanyerés). (II) 1 ml jégecet és 20 ml metanol elegyében feloldunk a fenti (b) lépésben kapott vegyidéiből 100mg-ot, majd a kapott oldathoz 100 mg palládiumkormot adunk. Az elegyet ezt követően atmoszférikus nyomáson 2 napon át katalitikus redukciónak vetjük alá, majd a katalizátort kiszűrjük. A kapott szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, a maradékot pedig 3 ml 0,005 mólos vizes ammónium-acetát-oldatban feloldjuk. Az így kapott oldatot ezután 2 cm átmérőjű és 30 cm hosszú, karboximetil-cellulózból készült oszlopra felvisszük, majd az oszlopot a fenti (I) módszernél ismertetett módon gradiens-módszerrel eluálásnak vetjük alá. A 350 ml és 460 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk, amikor is a kapott vegyület Rpértéke és fajlagos forgatóképessége azonos a fenti (I) módszerrel kapott vegyület megfelelő állandóival. (III) (III) 5 ml, 0,2 ml anizolt és 0,1 ml merkaptoetanolt tartalmazó vízmentes hidrogén-fluoridban a fenti (b) lépésben kapott vegyületet feloldjuk, majd az elegyet 0 °C-on 40 percen át keverjük. Az elegyet ezután csökkentett nyomáson bepároljuk a hidrogén-fluorid eltávolítására. A maradékot 10 ml vízben feloldjuk, majd az oldatot az olthatatlan anyagok elkülönítésére Celite márkanevű szűrőanyagon szűrjük. A szűrletet 1 cm átmérőjű és 10 cm hosszú, Amberlite CG-410 (acetát formájú) gyantából készült oszlopon átbocsátjuk, majd az oszlopot vízzel mossuk. Az eluáiumot és a mosófolyadékot elegyítjük, majd átbocsátjuk egy 2 cm átmérőjű és 30 cm hosszú oszlopon. Az oszlopot a fenti (I) módszernél ismertetett módon gradiens-módszerrel eluálásnak vetjük alá. A 340 ml és 460 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk, amikor is 42 mg mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk. Az így kapott vegyület Rpértéke, fajlagos forgatóképessége és ovulációt serkentő aktivitásának EDS0 értéke azonos a fenti (I) módszerrel kapott vegyület megfelelő értékeivel. (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Nle-Árg-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása (a) Z-Me-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása Hidrogénbromid jégecettel készült 25%-os oldatából 4 ml-ben feloldunk 477,5 mg Z-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3-t, majd a kapott oldatot szobahőmérsékleten 30 percen át keverjük. Ezt követően az oldathoz vízmentes étert adunk, majd a képződött csapadékot kiszűrjük, éterrel mossuk és csökkentett nyomáson nátrium-hidroxid felett szárítjuk. Ezzel egyidejűleg 2 ml etil-acetát és 2 ml dioxán elegyében feloldunk 265,3 mg Z-Nle-OH-t, majd a kapott oldathoz 0 °C-on 187 mg HONB-t és 226 mg DCC-t adunk. A kapott elegyet 3 órán át keverjük. A kivált karbamid-származékot kiszűrjük, majd a szűrletet az első bekezdésben ismertetett csapadék 1 ml dimetil-formamiddal készült oldatához hozzáadjuk. A kapott elegyhez ezután cseppenként 028 ml trietü-amint adunk, majd az elegyet 12 órán át keverjük és az oldószert ledesztilláljuk. A maradékot 100 ml kloroformmal extraháljuk, majd az extraktumot 5%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, 0,5 normál sósavoldattal és végül ismét vízzel mossuk, majd pedig vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Ezután a kloroformot ledesztilláljuk, majd a maradékot éterrel eldörzsöljük, etanolban feloldjuk és éterrel újra kicsapjuk a cím szerinti vegyületet. így 410 mg mennyiségben a 109-111°C olvadáspontú (bomlik) cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [<*]“=-50,4° (c = 0,5, etanolban). Elemzési eredmények a C27H4207N8 *0,5 H20 képlet alapján: számított: C = 54,07%, H=722%, N =18,68%, talált: C =53,59%, H=7,09%, N = 18,24%. (b) Z-(D)-Ala-Nle-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása Hidrogén-bromid jégecettel készült 25%-os oldatából 5 ml-ben feloldunk 200 mg Z-Nle-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2-CH3-t és a kapott oldatot szobahőmérsékleten 40 percen át keverjük, majd 50 ml vízmentes étert adunk hozzá. A képződött csapadékot kiszűrjük, éterrel mossuk, és szárítjuk. A csapadékot 40%-os vizes metanollal alkotott oldatában 1 cm átmérőjű és 5 cm hosszú, Amberlite IRA-410 (szabad formájú) gyantából készült oszlopon átbocsátjuk a hidrogén-bromid elkülönítésére. Az eluátumból a metanolt desztillálás útján eltávolítjuk, majd a maradékot liofilizáljuk, amikor is 120 mg port kapunk. Ezt követően 20 ml diklór-metán és 5 ml dimetil-formamid elegyében a kapott port és 44,7 mg Z{D)-Ala-OH-t feloldunk. A kapott oldathoz 0 °C-on 40 mg 6. példa 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
