173603. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-28086 jelű antibiotikumok előállítására
49 173603 50 Tápióka dextrin* 6,00% Enzimesen hidrolizált kazein** 0,60% Enzimesen hidrolizált kazein*** 0,20% Kálcium-karbonát 0,20% Magnézíum-szulfát-heptahidrát 0,05% Melasz 1,50% Finomított szójaolaj 5 mg/liter *Staley Dextrin 11, A.E. Staley Co., Decatur, HI. ** Amber EMC, Amber Laboratories, Juneau, Wise. ***NZ Amine A, Sheffield Chemical Co., Norwich, N.Y. A táptalaj pH-ja sterilezés után 6,8 ±0,1, a sterilezést 121° C hőmérsékleten, 30 percen át, 6,8—9,1 atmoszféra nyomáson autoklávban végezzük A beoltott termelő táptalajt 165 liter térfogatú fermentorban 10-12 napon át 28±l°C hőmérsékleten tenyésztjük. A táptalajon percenként a táptalaj térfogatára számítva 0,4 térfogat steril levegőt vezetünk át. A táptalaj keverését percenként 300-at forduló, hagyományos keverővei végezzük. 18. példa Az A 20 086 antibiotikumok előállítására megismételjük a 17. példában megadott eljárást, azzal a különbségei, hogy az alábbiakban megadott összetételű rázott tenyészet- és tankfermentor főfermentációs táptalajt használjuk. Tápióka dextrin* 3,00% Glükóz 1,50% Enzimesen hidrolizált kazein** 0,30% Enzimesen hidrolizált kazein*** 0,10% Élesztőkivonat 0,25% Kálcium-karbonát 0,20% Magnézíum-szulfát-heptahidrát 0,10% Melasz 1,50% Finomított szójaolaj 0,50% Csapvíz 100 ml-re *Staley Dextrin No. 11, A.E. Staley Co., Decaturr, Iil. **Amber EHC, Amber Laboratories, Juneau, Wise. ***NZ Amine A, Sheffield Chemical Co., Norwich, N.Y. A táptalaj pH-ja sterilezés után 6,4, a sterilezést autokláVban a 17. példában megadottak szerint végezzük. 5 19. példa A Streptomyces aureofaciens NRRL 8092 törzs által termelt A 28 086 antibiotikum-komplex elkü- 10 lönítése 60 liter, a 17. példában megadott eljárással előállított teljes tenyészlé pH-ját híg hidrogénkloriddal 3-ra állítjuk be. Szűrési segédanyag 15 (Hyflo Super-cel, Johns-Mansville Products Corp.) jelenlétében szűrjük a savas tenyészlevet. 30 liter metanollal extraháljuk a szűrési maradékként kapott és 1,56 g nátrium-hidrogén-karbonáttal kiegészített micéliumot, az extrakciót keveréssel 20 végezzük. Elkülönítjük az extraktumot, majd 30 liter metanollal újra extraháljuk a micéliumot. Egyesítjük a két metanolos extraktumot, majd a metanol eltávolítására csökkentett nyomáson desztilláljuk. A desztillációs maradékként kapott 25 körülbelül 7 liter térfogatú vizes oldat pH-ját híg hidrogénkloriddal 7,5-re állítjuk be. 2x7 liter etii-acetáttal extraháljuk az oldatot. Egyesítjük az etil-acetátos extraktumokat, és csökkentett nyomáson desztilláljuk, amikor desztillációs maradék- 30 ként olajos terméket kapunk. 1500 ml acetonban oldjuk az olajos desztillációs maradékot, majd 1500 ml vizet adunk az oldathoz. Híg hidrogénkloriddal 3-ra állítjuk be az elegy 35 pH-ját, majd 1 órán át keverjük. Szűréssel elkülönítjük a kivált csapadékot, 1500 ml acetonban oldjuk a szűrési maradékot, és 400 ml vizet adunk az oldathoz. Ezt az elegy et 16 órán át állni hagyjuk, amiután kristályos terméket kapunk. 40 Szűréssel elkülönítjük a kristályokat, és csökkentett nyomáson szárítjuk, amiután 74 g nyers, kristályos, A 28 086 A-t és D-t, továbbá más kristályos szennyezőanyagokat tartalmazó terméket kapunk. 45 40 g ilyen kristályos terméket 250 ml benzolban oldunk. 9 x 120 cm méretű, szüikagélből (Grace-Davidson, grade 62) készült kromatografáló oszlopra öntjük az oldatot. Az eluálást 40-40 liter, következő összetételű oldószereíeggyel végezzük: 50 1. Benzol 2. Benzol és etilacetát, 9 :1 3. Benzol és etilacetát, 4 :1 4. Benzol és etilacetát, 7 : 3 55 5. Benzol és etilacetát, 1 :1 6. Etilacetát 7. Metanol Egy liter térfogatú frakciókat gyűjtünk. Min>0 degyik frakcióval, az eluált vegyületek meghatározására, Bacillus subtilis-szel szemben értékmérést végzünk, és vékonyrétegkromatográfiásan vizsgálunk. Az A 28 086 I a 4 :1 arányú benzol és etilacetát eleggyel eluálódik. Az A 28 086 B '5 komponens ugyanezen 7 :3 arányú eleggyel együtt 25
