173603. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-28086 jelű antibiotikumok előállítására
51 173603 52 jön létre az oszlopról. Az A 28 086 A és D a benzol és etilacetát 7 :3 és 1 :1 arányú elegyével eluálódik, a 119-156. frakciókban. Ezeket a frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A desztillációs maradékot 500 ml acetonban oldjuk. 500 ml vizet adunk az acetonos oldathoz, híg hidrogénklorid oldattal 3-ra állítjuk be az elegy pH-ját, és egy órán át keverjük. Szűréssel elkülönítjük a kivált csapadékot, és 500 ml aceton és 180 ml víz elegyéből kikristályosítjuk. Szűréssel elkülönítjük a kristályokat, és csökkentett nyomáson szárítjuk, amikor 20,1 g, A és D komponenseket tartalmazó A 28 086 antibiotikumot kapunk. 20. példa Az A 28 086 A és D komponensek elkülönítése és tisztítása A 19. példában megadott eljárással előállított, A és D komponensekből álló, 18,8 g súlyú A 28 086 antibiotikumot 50 ml benzolban oldjuk. Az oldatot 7x100 cm méretű, szilikagélből (E. Merck, grade 60, 230 mesh-nél finomabb) készült kromatografáló oszlopra öntjük. Az oszlopot 90 ml/óra sebességgel a következő sorrendben a következő oldószerekkel eluáljuk: 1. 12 liter benzol 2. 12 liter 9 :1 arányú benzol és etilacetát elegy 3. 12 liter 4 :1 arányú benzol és etil-acetát elegy 4. 32 liter 7 : 3 arányú benzol és etil-acetát elegy 5. 10 liter metanol Az elúció követését B. subtilis bioautográfiával kapcsolt cellulóz vékonyrét eg kromatográfiáv?! (aiumíniumoxid alapú Merck, Darmstadt cellulóz) végezzük. A vékonyrétegkromatográfiához a következő oldószerelegyet használjuk: víz, metanol és etilacetát =12:3:1, az elegy pH-ját először ammóniumhidroxiddal 10,5-re, majd hidrogénkloriddal 7,5-re állítjuk be. 1 1 -2 liter térfogatú frakciókat gyűjtünk, míg az antibiotikus aktivitás megjelenik, ezután 200 ml-es frakciókat szedünk. A csak A 28 086 D-t tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson desztilláljuk. A száraz desztillációs maradékot aceton és víz 1:1 arányú elegyéből kikristályosítjuk, a kristályokat elkülönítjük, és csökkentett nyomáson szárítjuk. így 140 mg kristályos A 28 086 D-t kapunk. Az A 28 086 D-t nyomnyi mennyiségű A 28 086 A-val együtt tartalmazó frakciókkal szintén a fentiek szerint járunk el, amikor további 150 mg kristályos, kevés A 28 086 A-t tartalmazó A 28 086 D-t kapunk. Szintén a fentiek szerint járunk el a csak A 28 086 A-t tartalmazó frakciókkal, amikor 4,7 g kristályos A 28 086 A-t kapunk. 21. példa Az A 28 086 antibiotikumok előállítására a 16. példában megadott eljárást ismételjük meg, azzal a különbséggel, hogy a törzset a következő összetételű ferdeagaron tartjuk fent. Húskivonat 0,20% Dextrin 2j00% Élesztőkivonat 0,20% Enzimesen hidrolizált kazein 0,40% Kobalt-klorid-szeksztahidrát 0,002% Agár 2,00% Desztillált víz 100 ml-re A táptalaj pH-ját káliumhidroxiddal 7,0-re állítjuk be, és oltás után 7 napon át 28°C hőmérsékleten inkubáljuk a tenyészetet. 22. példa Az A 28 086 antibiotikumok előállítására a 17. példában megadott eljárást ismételjük meg, azzal a különbséggel, hogy a következő összetételű rázott/termelő táptalajt használjuk: Tápióka dextrin+ 8,00% Enzimesen hidrolizált kazein++ 1,50% Melasz i ,50% Kálcium-karbonát 0,20% Diammónium-szulfát 0,10% Magnézium-szulfát 0,05% Finomított szójaolaj 0,46% +Staley Dextrin No. 11, A.E. Staley Co., ^ Decatur, ül, ~Amber EHC, Amber Laboratories, Juneau, Wise. 23. példa Az A 28 086 antibiotikumok előállítására megismételjük a 21. példában megadott eljárást, »^al a különbséggel, hogy az alábbiakban megadott összetételű harmadik vegetatív táptalajt is közbeiktatunk a tenyésztés során: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 26
