173603. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-28086 jelű antibiotikumok előállítására
45 173603 46 fázistól a szerves oldószeres extraktumot, és körülbelül 500 ml térfogatúra töményítjük. Ezt a tömény etil-acetátos sűrítményt fölös mennyiségű petroléterhez (Skelly Solve F, 10 liter) adjuk, amikor csapadék válik ki az oldatból, amit 5 elkülönítünk, A szűrletet csökkentett nyomáson desztilláljuk, amikor desztillációs maradékként megkapjuk a 6,9 g súlyú, eredetileg a fermentlé folyékony halmazállapotú részében levő A 28 086 antibiotikum-komplexet. 10 Az A 28 086 antibiotikum-komplex micéliumon levő részének elkülönítésére a szűrési maradékként kapott micéliumot kétszer, közelítőleg fél térfogatnyi, 62 liter és 59 liter metanollal extraháljuk. Egyesítjük a két metanolos extraktumot, majd a 15 metanol eltávolítására csökkentett nyomáson desztilláljuk. A desztilláció után 10 liter vizes fázis marad hátra. Ennek pH-ját híg nátriumhidroxid oldattal 7,5-re állítjuk be. Kétszer, körülbelül azonos térfogatnyi, 9 üter és 10 liter etil-acetáttal 20 extraháljuk az oldatot, egyesítjük az extraktumokat, majd körülbelül 400 ml térfogatúra töményítjük. A tömény etil-acetátos extraktumot a szennyezőanyagok eltávolítására, a tömény szűrlet kapcsán ismertetett eljárást megismételve nagy 25 fölöslegű petroléterhez öntjük. A szűrletből 20,6 g, eredetileg a micéliumon levő A 28 086 antibiotikum-komplexet kapunk. 4. példa Az A 28 086 antibiotikum-komplex A és B komponenseinek elkülönítése 35 A 3. példában megadott eljárással előállított, 235 g súlyú, eredetileg a micéliumon levő A 28 086 antibiotikum-keveréket 80 ml benzolban oldunk. A benzolos oldatot 9x130 cm méretű, 8 üter Matheson grade 62 szilikagéllel töltött kromatografáló 40 oszlopra töltjük. Az oszlopot különböző benzol-etil-acetát elegyekkel eluáljuk. Az eluációt vékonyrétegkromatográfiával ellenőrizzük. 90 :10 arányú benzol és etilacetát elegyével végezve az eluálást, először a B jelű vegyidet eluálódik, és izolálható 45 tisztán. A 43 mg súlyú A 28 086 B-t aceton és víz elegyéből kikristályosítva 150-153°C olvadáspontú terméket kapunk. Az eluálást fokozatosan növekvő mennyiségű etü-acetátot tartalmazó benzol-etü-acetát eleggyel 50 folytatjuk, amikor az A 28 086 A eluálódik. Az A komponenst tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson desztilláljuk. A száraz desztillációs maradékot 150 ml acetonban oldjuk, majd 150 ml vizet adunk az acetonos oldathoz. 55 Az így kapott oldat pH-ját 1 n hidrogénklorid oldattal 3-ra állítjuk be. Egy órán át keverjük a savas el egyet, mialatt csapadék válik ki belőle. Szűréssel elkülönítjük a csapadékot, és 150 ml acetonból 60 ml víz hozzáadása után kikristályo- 60 sítjuk. Egy éjszakán át csökkentett nyomáson szárítjuk a terméket, amikor 6,6 g A 28 068 A komponenst kapunk. A szűrletből részlegesen eltávolítjuk az acetont, amikor további 1,2 g A 28 068 A-t kapunk. 65 Az A 28 068 A-acetil-észter előálütása 7,4 g A 28 068 A-t 150 ml piridinben oldunk. 50 ml ecetsav-anhidridet adunk az oldathoz, majd erőteljesen összekeverjük az elegyet, és egy éjszakán át szobahőmérsékleten hagyjuk állni. 200 ml vizet adunk a reakcióelegyhez, és erőteljesen összekeverjük. 4 órán át szobahőmérsékleten hagyjuk állni az elegyet, amikor fehér színű csapadék válik ki. Ezt szűréssel elkülönítjük, vízzel mossuk, és levegőn szárítjuk. Az így kapott szilárd halmazállapotú terméket 100 ml acetonban oldjuk, az acetonos oldatot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. Ezt háromszor megismételjük. A desztiüációs maradékot 100 ml aceton és 50 ml víz elegyéből kikristályosítjuk, amikor 6,14 g, 100—103°C olvadáspontú A 28 086 A-acetil-észtert kapunk. 5. példa 6—9. példa Az 5. példában megadott eljárást ismételjük meg, azzal a különbséggel, hogy piridin jelenlétében az A 28 086 A-t propionsav-anhidriddel reagáltatjuk, amikor 96-98°C hőmérsékleten olvadó A 28 068 A-propionÜ-észtert kapunk. Az 5. példában megadott eljárást ismételjük meg, azzal a különbséggel, hogy piridinnel készült reakcióelegyben az A 28 086 A-t n-vajsav-anhidriddel reagáltatjuk, amikor 79—81 °C hőmérsékleten olvadó A 28 086 A-n-butirü-észtert kapunk. Az 5. példában megadott eljárást ismételjük meg, azzal a különbséggel, hogy piridinnel készült reakcióelegyben az A 28 086 A-t kapronsav-anhidriddel reagáltatjuk, amikor 163-167*C hőmérsékleten olvadó A 28 086 A-kaproil-észtert kapunk. Az 5. példában megadott eljárást ismételjük meg, azzal a különbséggel, hogy piridinnel készült reakcióelegyben az A 28 086 A-t valeriánsav-anhidriddel reagáltatjuk, amikor 173—175°C hőmérsékleten olvadó A 28 086 A-valeril-észtert kapunk. 10. példa Az A 28 086 antibiotikum-komplex A komponens nátriumsójának előállítása 500 mg A 28 086 A-t 50 ml acetonban oldunk. 50 ml vizet adunk az oldathoz, majd pH-ját 5 n nátriumhidroxid oldattal 10,5 és 11 közötti értékre állítjuk be. Egy órán át keverjük az elegyet, majd etÜ-acetáttal extraháljuk. Csökkentett nyomáson desztilláljuk az etü-acetátos extraktumot, a száraz desztillációs maradékot aceton és víz elegyből kikristályosítjuk. így 378 mg, 120°C és 123°C közötti hőmérsékleten olvadó A 28 086 A-nátriumsót kapunk. 23
