173457. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 18-, 19-, és 20-hidroxi-prosztaglandin-származékok mikrobiológiai előállítására
41 173457 42 Az la) példa szerint eljárva Stemphylium solani (NRRL 1805) tenyészetét 10—10 táptalajban szaporítjuk. A beoltás után 18 órával a 4. és 8. eljárások szerint előállított dl-9a,l 50-dihidroxi-proszt-l 3(t)-énsavat 2,5 ml 50%-os vizes etanolban oldva adjuk a táptalajhoz, és 24 órán át 26 C#-on inkubáljuk. A vékonyrétegkromatogram szerint új vegyidet képződött, amely polárisabb, mint a kiindulási anyag. A fermentlét szűrjük, a szűrletet 10%-os vizes citromsav-oldattal 3 pH-értékre savanyítjuk, és 3x20 ml etilacetáttal extraháljuk. Az extraktumot csökkentett nyomáson bepároljuk, és a maradékot 1% ecetsavval előkezelt szilikagél-oszlopon kromatografálva tisztítjuk, az eluálást 0,1% ecetsavat tartalmazó etilacetát-heptán 8 :3 keverékével eluáljuk. A megfelelő frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson bepároljuk. 7 mg 9a,150,20-trihidroxi-proszt-l 3(t)-énsavat kapunk. A termék szililezett metilészterének jellemzői: C-érték: 25,5. R}-: 0,26. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 586. Intenzív csúcsok: 427, 337, 297, 129, kevésbé jellemző fragmensek: 367, 197, 170, 142, 103. b) A fenti módon eljárva a 4. és 8. eljárások szerint előállított dl-9/3,150-dihidroxi-proszt-l 3(t)-énsavat 90,15/3,20-trihidroxi-proszt-13(t)-énsawá alakítjuk. A termék szililezett metilészterének jellemzői: C-érték: 25,5. Rf: 0,22. Kitermelés 30%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 586. Intenzív csúcsok: 427, 337, 129, kevésbé jellemző fragmensek: 367, 297, 197, 170, 142, 103. c) A fenti módon eljárva 9-oxo-15a-hidroxi-proszta-5(c),8(12),13(t)-triénsavat (PGB2) Aspergil lus nigerrel (ATCC 9142) 9-oxo-15a,20a-dihidroxi-proszta-5(c),8(l 2),13(t)-triénsawá alakítunk. Rf: 0,19. Kitermelés 26%. A védett termék jellemzői: C-érték: 28,5. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 537. Intenzív csúcsok: 506, 416, 378, 162, kevésbé jellemző fragmensek: 436, 246, 232, 184, 103. d) A fenti módon eljárva 9-oxo-15a-hidroxi-proszta-5(c),10,13(t)-triénsavat (PGA2) Preussia fleischhakii (CBS 167.40) mikroorganizmussal 9-oxo-15a,20-dilűdroxi-proszta-5(c),l 3(t)-diénsawá alakítunk. Rf: 0,24. Kitermelés 18%. A védett termék jellemzői: C-érték: 27,1. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 539. Intenzív csúcsok: 508, 129, kevésbé jellemző fragmensek: 438, 380, 348, 226, 220, 198, 184, 142, 103. 5. példa e) A 7. és 8. eljárások szerint előállított d 1 -9 -o xo -15 a -hidroxi-15/3-met il-20-etil-proszt-l 3(t )-énsavat a fenti módon Preussia fleischhakii (CBS 167.40) mikroorganizmussal 9-oxo-15a,20kszi-dihidroxi-l 50-met il-20kszi-et il-pro szt - -13(t)-énsawá alakítjuk. Rf: 0,42. Kitermelés 22%. A védett termék jellemzői: C-érték: 27,8. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 583. Intenzív csúcsok: 396, 143, 131, kevésbé jellemző fragmensek: 464, 462, 366, 364, 239, 144. f) A 7. és 8. eljárások szerint előállított dl-9 -oxo -1 50-hidroxi-l 5a-metil-20-etil-proszt-l 3(t)-énsavat a fenti módon Preussia fleischhakii (CBS 167.40) mikroorganizmussal 9oxo-150,2Okszi-dihidroxi-15a-metil-20kszi-etil-proszt-l 3(t)-énsawá alakítjuk. Rf: 0,43. Kitermelés 21%. A védett termék jellemzői: C-érték: 27,8. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 583. Intenzív csúcsok: 396, 143, 131, kevésbé jellemző fragmensek: 464, 462 , 366, 239. g) A 4. és 8. eljárások szerint előállított dl-9a,l 5a-dihidroxi-20-etil-proszt-l 3(t)-énsavat a fenti módon 9a,15a,20kszi-trihidroxi-20kszi-etil-proszt-13(t)-énsawá alakítjuk. Rf: 0,30. Kitermelés 22%. A védett termék jellemzői: C-érték: 26,3. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 614. Intenzív csúcsok: 427, 337, 297, 246, 131, 129, kevésbé jellemző fragmensek: 585, 495, 323, 310, 211. h) A 6. és 8. eljárások szerint előállított dl-9a,l 5a-dihidroxi-l 50-metil-2O-etil-proszt-l 3(t)-énsavat a fenti módon 9a, 15a,20kszi-trihidroxi-l 50- -metil-20kszi-etil-proszt-l 3(t)-énsawá alakítjuk. Rf: 0,35. Kitermelés 20%. A védett termék jellemzői: C-érték: 26,2. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 628. Intenzív csúcsok: 441, 351, 297, 143, 131, kevésbé jellemző fragmensek: 509, 419, 323, 239. i) A fenti módon eljárva, a 6. és 8. eljárások szerint előállított dl-9a,l 50-dihidroxi-l 5a-metil-20--etil-proszt-13(t)-énsavat 9a,150,2Okszi-trihidroxi-15a-metil-20kszi-etil-proszt-l 3(t)-énsawá alakítjuk. Rf: 0,36. Kitermelés 22%. A védett termék jellemzői: C-érték: 26,3. Molekulacsúcs a tömegspektrumban : m/e = 628. Intenzív csúcsok: 441, 351, 297, 143, 131, kevésbé jellemző fragmensek: 509 , 419 , 323 , 239. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 21
