173457. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 18-, 19-, és 20-hidroxi-prosztaglandin-származékok mikrobiológiai előállítására
37 ! O'* J ! 38 A védett 18-hidroxi-termék (szililéter, metoxim, metilészter) fizikai jellemzői: C-érték: 27,0. Rf: 0,44. Kitermelés 12%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 583. Intenzív csúcsok: 396, 143, kevésbé jellemző fragmensek: 526, 462 , 436, 366, 364, 171, 159. A védettt 19-hidroxi-termék jellemzői: C-érték: 27,4. Rf: 0,42. Kitermelés 20%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 583. Intenzív csúcsok: 396, 171, 145, 143, kevésbé jellemző fragmensek: 462, 450, 366, 364, 239. 3. példa a) Streptomyces sp. (CBS 188.74) ferde ager-tenyészetével beoltunk 500 ml-es kónikus palackban 100 ml következő összetételű táptalajt: pepton 10g/liter, malátapép 15 g/liter nátrium-klorid 5 g/liter, desztillált víz, a pH-értékét 30%-os vizes káliumhidroxid-oldattal 7,2-re beállítjuk. A sterilizálást 120 C°-on 20 percig végezzük. A palackot 26 C*on 72 órán át inkubáljuk forgó rázógépen (280 ford/perc, 2,5 cm kilengés). Az így kapott tenyészet 5 ml-ével beoltunk 100 ml következő összetételű táptalajt 500 ml-es kónikus palackban: glükóz 10 g/liter, szárított kukoricalekvár 3 g/liter, pepton 5 g/liter, NaCl 5 g/liter, csapvíz, a pH-értékét 30%-os vizes káliumhidroxid-oldattal 7,2-re állítjuk be. A sterilizálást 120C°-on 20 percig végezzük. A palackot 26 C*-on 72 órán át forgó rázógépen inkubáljuk, majd 20 mg 9-oxo-lla,15a-dihidroxi•proszt-13(t)-énsavat (PGEi) 2,5 ml 50%-os etanolban oldva adunk a tenyészethez, és még 24 órán át inkubáljuk. A vékonyrétegkromatogram szerint két vegyület képződik, amelyek a kiindulási vegyületnél polárisabbak. A fermentlét szűrjük, a szűrlet pH-értékét 10%-os vizes citromsav-oldattal 3-ra savanyítjuk, és 3 x 30 ml etilacetáttal extraháljuk. Az extraktumot csökkentett nyomáson bepároljuk, és a maradékot 1% ecetsavval és 19% vízzel előkezelt szilikagél-oszlopon kromatografáljuk, az eluálást 0,1% ecetsavat tartalmazó etilacetáttal végezve. A megfelelő frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson bepároljuk. A két átalakult termék közül a kevésbé polárist 5 fi mg hozammal kapjuk olaj alakjában, ez a termék a kombinált gázkromatográfiás-tömegspektrométeres vizsgálat szerint a 9-oxo-lla,15a,18kszi-trihidroxi-proszt-13(t)-énsav. RÍ1: 0,27. A védett termék jellemzői: C-érték: 26,6. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 629. Intenzív csúcsok: 297, 133, 131, 129, kevésbé jellemző fragmensek: 598, 510, 470, 420, 380, 366, 310, 223, 197, 144. Az átalakult termékek közül a polárisabbat szintén olaj alakjában kapjuk (4 mg). Ez a vegyület a kombinált gázkromatográfiás-tömegspektrometriás vizsgálat szerint a 9-oxo-lla,15a,19kszi-trihidroxi-proszt-13(t)-énsav. RÍ1: 0,23. A védett vegyület jellemzői : C-érték: 27,0. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 629. Intenzív csúcsok: 366, 297, 223, 183, 143, 133, 129, 117. b) A fenti módon 9-oxo-lla,15a-dihidroxi-proszta-5(c),l 3(t)-diénsavat (PGE2) 9-oxo-lla,- 15a,18kszi-trihidroxi-proszta-5(c),13(t)-diénsawá és 9-oxo-11a,15a ,19kszi-trihidroxi-proszta-5(c),l 3(t)-énsavvá alakítunk. A védett 18-hidroxi-termék jellemzői: C-érték: 26,6. Rf1: 0,28. Kitermelés 35%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 627. Intenzív csúcsok: 596, 506, 366, 295, 223, 133, 131, 129, kevésbé jellemző fragmensek: 508 , 468, 418, 378, 364, 197, 144. A védett 19-hidroxi-termék jellemzői: C-érték: 26,9. Rf1: 0,24. Kitermelés 40%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 627. Intenzív csúcsok: 596, 506, 366, 295, 223, 143, 133, 129, 117, kevésbé jellemző fragmensek: 468, 378 , 364, 197. c) A fenti módon 9a,lla,15a-trihidroxi-proszta-5(c), 13(t)-diénsavat (PGF2<*) átalakítunk 9a,lia,15a,18kszi-tetrahidroxi-proszta -5 (c) ,13(t )-diénsawá és 9a,lla,15a,19kszi-tetrahidroxi-proszta-5(c),13(t)-diénsawá. A védett 18-hidroxi-termék jellemzői: C-érték: 25,0. Rf1: 0,22. Kitermelés 20%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 672. Intenzív csúcsok: 423 , 333 , 307 , 217, 197, 191, 171, 131, 129, kevésbé jellemző fragmensek: 643, 582, 553, 513, 481, 397. A védett 19-hidroxi-termék jellemzői: C-érték: 25,3. RÍ1: 0,19. Kitermelés 22%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 672. Intenzív csúcsok: 423, 333 , 307 , 217, 197, 191, 143, 129, 117, kevésbé jellemző fragmensek: 657, 582, 567, 531, 513, 481, 397. d) A fenti módon eljárva, a 4. és 8. eljárások szerint előállított dl-9a,l 5a-dihidroxi-20-etil-proszt-13(t)-énsavat 9a,15a,18kszi-trihidroxi-20-etil-proszt-13(t)-énsawá és 9a,15a,19kszi-trihidroxi-20-etil-proszt-13(t)-énsawá alakítjuk. A védett 18-hidroxi-termék jellemzői: C-érték: 25,6. Rf: 0,35. Kitermelés 17%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 614. Intenzív csúcsok: 427, 337, 297, 129, kevésbé jellemző fragmensek: 557, 467, 377, 225, 159. A védett 19-hidroxi-vegyület jellemzői: C-érték: 25$. Rf: 0,33. Kitermelés 25%. 19 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
