173379. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 4-dezacetoxi-vinblasztin és savaddiciós sói előállítására
9 173379 10 2. példa 4-Dezacetoxi-vinblasztin tisztítása Az 1. példa szerint előállított 1,7 g nyers 4-dezacetoxi-vinblaszint 3 : 2 arányú metanol—víz elegy 25 ml-ében oldjuk. Az oldatot 5 °C-ra hűtjük, 16 órán át állni hagyjuk. A kivált kristályokat szűrjük, 3—4 ml 5 °C-ra hűtött 3: 2 arányú metanol—víz-eleggyel mossuk, szárítjuk. Kitermelés: 1,3 g dezacetoxi-vinblaszin. Op.: 190—193 °C. [<x]d = + 107° (C=l, kloroform). Elemanalízis a C44H5fN407 összegképlet alapján: számított %: C 70,19; H 7,50; N 7,44; O 14,87; talált %: C 69,85; H 7,52; N 7,23; O 14,97. Tömegspektrum A 4-dezacetoxi-vinblasztin tömegspektrumát a vinblasztinnal összehasonlítva vizsgáltuk. A molekulaioncsúcs a dezacetoxi-vegyületnél 58 tömegegységgel kisebb tömegszámnál mérhető (m/e=752), mint a vinblasztiné (m/e=810). A különbség az acetoxi-csoport tömegével azonos. Mindkét diindol-alkaloid egy velbamin és egy vindolin-részből áll. Minthogy a velbamin fragmensre és a velbamin-rész bázis csúcsára jellemző tömegszámok a dezacetoxi-vinblasztin tömegspektrumában is jelentkeztek (m/e 355 és m/e 154), ebből következik, hogy a kérdéses acetoxi-csoport a vindolin fragmensből hiányzik. Hasadási utak alapján (m/e 122, 135, 224) valószínűsíthető, hogy az acetoxi-csoport a vinblasztin 4-szénatomjáról hiányzik. Protonmágneses-magrezonancia-spektrum A 4-dezacetoxi-vinblasztin protonmágneses-magrezonancia (PMR) spektrumát a vinblasztinéval összehasonlítva azt tapasztaltuk, hogy a vinblasztinnál a 8=2,09 ppm-nél mérhető, a 4-acetoxi-csoportra jellemző csúcs a 4-dezacetoxi-vinblasztin spektrumában nem jelentkezik. A 4-dezacetoxi-vinblasztin PMR színképében mérhető jellemző csúcsok: 8 = 2,73 ppm N-metil-protonok 8 = 3,60 ppm karbometoxi-protonok 8 = 3,81 ppm aromás OCH9 protonok 8 = 3,85 ppm karbometoxi-protonok. 3. példa 4-Dezacetoxi-vinblasztin-szulfát 1,1 g az 1. példa szerint előállított nyers 4-dezacetoxi-vinblasztinhoz 4,5 pH érték eléréséig 1,25%-os kénsavas etanolt adunk, majd 2 órán át 5 °C-on állni hagyjuk. A kristályos oldatot leszűrjük, a kristályokat 2—3 ml 5 °C-os etanollal mossuk. Kitermelés : 0,95 g nyers 4-dezacetoxi-vinblasztin-szulfát, melyet kívánt esetben a következőképpen kristályosítunk át : 0,95 g nyers 4-dezacetoxi-vinblasztin-szulfátot 25 ml metanolban oldunk, majd 125 ml acetont adunk az oldathoz. A kristályos oldatot 2 órán át 5 °C-on állni hagyjuk, majd szűrjük, 2—3 ml hűtött acetonnal mossuk, szárítjuk. Kitermelés: 0,88 g tisztított dezacetoxi-vinblasztin-szulfát. fa]“ =+29,0° (C=l metanol). 4. példa 4-dezacetoxi-vinblasztin-szulfátot tartalmazó készítmény Az alábbiak szerinti összetételű oldószerampullát és szárazampullát készítünk, melyeket közvetlenül a felhasználás előtt kell összekeverni. Szárazampulla : 1, 5 vagy 7 mg 4-dezacetoxi-vinblasztin-szulfát liofillizátumot tartalmaz. Oldószerampulla : 5 ml fiziológiás nátriumklorid-oldat 50 mg benzilalkohol 50 mg laktóz 5. példa 4-dezacetoxi-vinblasztin kinyerése a kromatografálásnál kapott 11—19. eluátumfrakcióból A kromatografálással bezárólag az 1. példa szerint járunk el. (3—10. frakcióból a 4-dezacetoxi-vinblasztin főtömegét, a 20—24. frakcióból vinblasztint, a 25—36. frakcióból dezacetil-vinblasztint és a 36—45. frakcióból a vinkrisztint az 1. példával azonos módon nyerjük ki.) A 11—19. eluátumfrakció 1 : 1 arányú vinblasztinszulfát : 4-dezacetoxi-vinblasztinszulfát keveréket tartalmaz. Kettő vagy több sarzs 11—19. frakcióját a következőképpen dolgozhatjuk fel : A) Dezacetilezés sósavval 1 g 1: 1 arányú vinblasztinszulfát : 4-dezacetoxi-vinblasztinszulfát keverékét 20 ml tömény sósavban oldunk és az oldatot szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A dezacetileződés körülbelül 6 óra alatt végbemegy. Ezután a reakcióelegyet kétszeres térfogatú jegelt vízbe öntjük, a pH értéket tömény vizes ammóniumhidroxid-oldattal 8,5—9-re állítjuk be, majd a meglúgosított oldatot kétszer 20 ml, majd ezt követően kétszer 10 ml metilénkloriddal extraháljuk. Kitermelés: 0,7 g 1: 1 arányú dezacetil-vinblasztin : 4- -dezacetoxi-vinblasztin keverék. B) Dezacetilezés káliumkarbonáttal (alternatív megoldás) 1 g 1: 1 arányú vinblasztin-szulfát : 4-dezacetoxi-vinblasztin-szulfát keveréket 25 ml metanolban oldunk, majd 2,5 g káliumkarbonátot adunk az oldathoz. A reakciókeveréket 3—4 órán át szobahőmérsékleten keverjük, az elreagálatlan káliumkarbonátot kiszűrjük és a szűrőn kétszer 5 ml kloroformmal átmossuk. A szűrlethez 15 ml vizet adunk a lúgnyomok eltávolítása céljából. A fázisokat elválasztjuk, a szerves fázist nátriumszulfáttal vízmentesítjük, szűrjük, és a szűrletet szárazra pároljuk. Kitermelés: 0,7 g szárazmaradék, mely 1: 1 arányú dezacetil-vinblasztin és 4-dezacetoxi-vinblasztin keveréke. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
