173366. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szteroidok mikrobiológiai oxidálására
3 173366 4 merteti olyan táptalajon, amely körülbelül 0,22 s% szójababolajat és körülbelül 1,5—2,0 súly% szójabablisztet tartalmaz. A 16 147/1971 számú japán szabadalmi leírás 4. példája koleszterinnek ADD-vé és androszt-4-én-3,17-dionná történő mikrobiológiai oxidációját körülbelül 0,1 s% szójababolajat tartalmazó táptalajon ismerteti. A 29 193/1971 számú japán szabadalmi leírás 1. példája litokolsavnak ADD-vé és androszt-4-én-3,17-dionná történő mikrobiológiai oxidációjára vonatkozik 0,2 s% szójababolajat tartalmazó táptalajon. A Biotechn. and Bioeng. 11, 1255—1270 (1969) folyóiratban 0,22 s% szójababolaj és körülbelül 1,5-2,0 s% szójababliszt-tartalmú táptalajt alkalmaznak 9a-fluor-11(3-17,21 -trihidroxi-pregn-4-én-3,20-dion-21-acetátnak 9a-fluor-l 1/3,16a, 17,21-te trahidroxi-pregna-1,4-dién-3,20-dionná (triamcinolon) történő mikrobiológiai oxidációjakor. Kísérleti úton megállapítottuk, hogy szterinek, illetve sztereoidok mikrobiológiai oxidációja során ilyen csekély mennyiségű glicerid, illetve gliceridtartalmú anyag alkalmazása a DHT és ADD kitermelését csak kis mértékben növeli. Az ADD mikrobiológiai előállítására további eljárásokat ismertet a 153 831 lajstromszámú magyar szabadalmi leírás, az Agr. Biol. Chem. 34(6), 838 (1970), a Chem. Abstr. 71, 57 875j (1969) és 77, 112 448y (1972) közlemények és a 74, 50 192, 74, 00 490, 74, 101 591 és 75, 100 290 számú nyilvánosságrahozott japán szabadalmi bejelentések. Az ismertetett eljárásokban zsírok és olajok vagy zsírok és olajok, továbbá növényi lisztek használhatók, valamint ezeknek a szteroidoknak mikrobiológiai oxidálásában való jelentőségét nem említik, és az alkalmazott táptalajok ezeket a komponenseket nem tartalmazzák. A találmány alapja az a célkitűzés, hogy a 17-hidroxi-androszta-1,4-dién-3-on és/vagy androszta-1,4- -dién-3,17-dion előállítására szterinek vagy A4-3-ketovagy A1,4-3-keto-származékaik mikrobiológiai oxidációjára olyan eljárást dolgozunk ki, amellyel az említett szteroidokat jó kitermeléssel és koncentráltan kapjuk. Meglepő módon azt találtuk, hogy ha a fermentációt Arthrobacter, Nocardia, Corynebacterium, Mycobacterium, Protaminobacter és Brevibacterium nembe tartozó mikroorganizmusokkal olyan táptalajon végezzük, amely legalább 0,3% gliceridet tartalmaz glicerid, zsír, olajos magok vagy olajos gyümölcsök alakjában, a DHT-t és ADD-t nagy kitermeléssel és koncentrációban kapjuk. Az előzőekben említett nyomtatványokban ismertetett eljárásokkal elérhető legnagyobb ADD kitermelést a találmányunk szerinti eljárás 8. példájával összehasonlítva a következő eredményt kaptuk. Eljárás ADD Kitermelése Og/ml) találmány szerinti (8. példa) 1110 Agr. Bioi. Chem. 34(6), 838 (1970) 300 Chem. Abstr. 71, (57 875j (1969) 800 (77, 112 448y (1972) 620 74, 50192 600 74, 00 490 400 74, 101 591 650 2 75,100 290 sz. japán nyilv. hoz. iratok 500 153 831 lsz. magyar szabadalmi leírás 230 Az 1. ábrán feltüntettük a találmány szerinti eljárásban a koleszterin (A), koleszt-4-én-3-on (B), koleszta-l,4-dién-3-on (C), DHT (D) és ADD (E) koncentrációjának (mg/50 ml) változását a fermentációs idő (óra) függvényében. Az [A] reakcióséma a szterinek mikrobiológiai oxidációjának lefolyását ismerteti a 3 388 042 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint. Ebben a sémában R 8-10 szénatomos oldalláncot jelent. A találmány szerinti eljárásban használt kiindulási anyagok szterinek, A4-3-keto- és A1,4-3-keto-származékaik. A szterineknek a 3-helyzetben hidroxilcsoportjuk, az 5-helyzetben kettős kötésük, a 17-helyzetben 8—10 szénatomos oldalláncúk és néhány esetben a 7-helyzetben kettős kötésük van. A szterinek közül megemlthetjük a koleszterint, sztigmaszterint, kampeszterint, szitoszterint, ergoszterint, brasszikaszterint és fukoszterint. Különösen előnyös kiindulási szterinek a koleszterin, sztigmaszterin, kampeszterin és szitoszterin. Kiindulási szteroidként a megfelelő A4-3-keto- és A1,4-3-keto-származékok is használhatók. A táptalajban a kiindulási szteroid koncentrációja nem kritikus. Általában körülbelül 0,05—5 s%, előnyösen körülbelül 0,1—3 s%. A találmány értelmében a táptalajhoz legalább 0,3 s% glicerid mennyiségben gliceridet, zsírt, olajos magot vagy olajos gyümölcsöt adunk. A találmány szerint használható gliceridek közül megemlíthetjük a monoglicerideket, diglicerideket és triglicerideket. Egységes gliceridek és két vagy három különböző zsírsavrészt tartalmazó vegyes gliceridek is használhatók. A zsírsavrészek telítetlen és/vagy telített zsírsavakból vezethetők le. Az alkalmazható monogliceridek közül különösen megemlíthetjük az a-monoacetint, /3-monoacetint, a-monopalmitint, /3-monopalmitint, a-monosztearint, /3-monosztearint, a-monooleint és /3-monooleint, a digliceridek közül az a,a’-diacetint, aJí-diacetint, a.a’-dipalmitint, a^-dipalmitint, a,a’-disztearint, a^-disztearint, a,a’-díoleint és a^-dioleint, valamint trigliceridjeiket, például triacetint, trilaurint, trimirisztint, tripalmitint, trisztearint és trioleint. A zsírsav-csoportok előnyösen legfeljebb 26 szénatomot tartalmaznak. A vegyes gliceridek közül példaképpen megemlítjük az l-aceto-2,3-dipalmitint, 1-palmito-2,3-dikaprint, l-lauro-2-miriszto-3-palmitint, 2-oleo-1,3-dipalmitint és 2-sztearo-l,3-dioleint. A találmány szerinti eljárásban gliceridként zsírok is használhatók. A zsírmeghatározás felöleli a növényi zsírokat és olajokat, valamint az állati zsírokat és olajokat. Az alkalmazható növényi zsírok közül különösen a lenolaj, perillaolaj, faolaj, szezámolaj, kukoricaolaj, repceolaj, gyapotmagolaj, sáfrányolaj, szójababolaj, szójalecitin, kamillaolaj, rizsolaj, olívaolaj, ricinusolaj, földimogyoróolaj, kókuszdióolaj, pálmaolaj és pálmamagolaj haználható. Különösen előnyös a gyapotmagolaj, szójababolaj, repceolaj, pálmaolaj és pálmamagolaj. Az állati zsírok közül megemlíthetjük a halolajat, cetolajat, marhafaggyút, szalonnát, birkafaggyút, szar-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
