173065. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-védett aminosavak extrakciójára
13 173065 0,24 g (0,575 mmól) (6R,7R)-3-acetoximetil-7-(4- -karboxibutánamido)-cef-3-em4-karbonsavat tartalmazó szuszpenzióhoz hozzáadunk 15 ml diklórmetánban oldott 0,5 g (1,5 mmól) difenildiazometánt. Az elegy pH-ját ortofoszforsawal 15 perc alatt, keverés közben 2,0 értékre állítjuk be, majd az elegyet további 75 percen keresztül szobahőmérsékleten keverjük. Szétválasztás után a szerves fázist 2 x 25 ml 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, majd 25 ml vízzel mossuk. Szárítás után az oldatot vákuumban bepárolva gumi-konzisztenciájú párlási maradékot kapunk, amelyet 40—60 °C-os forráspontú petroléterrel kezelve 0,58 g végtermék különíthető el. A végtermék szerkezeti azonosságát infavörös és mágneses magrezonancia-spektroszkópiás vizsgálatokkal erősítettük meg. 8. példa (6R,7R)-7-(R-5-izobutoxikarbonilamino-5-karboxipentánamido) -3-hidroximetil-cef-3-em-4-karbonsav-bisz-fenil-(o-toKl)-metilészter 11,2 g (20 mmól) 67,1%-os tisztaságú kálium-(6R,7R)-7-(R-5-amino-5-karboxipentánamido)-3-hidroximetil-cef-3-em-4-karboxilát 100 ml vízben készített oldatához 1 óra alatt hozzáadunk 16 ml (120 mmól) klórhangyasav-izobutilésztert. Az adagolás közben az elegy pH-ját 7,8—8,0 értéken tartjuk. Az elegyet — a pH 7,7—8,0 értéken tartása közben - további 30 percen keresztül keverjük, majd ortofoszforsawal 5,0 pH-ig savanyítjuk és 2 x 100 ml kloroformmal extraháljuk. A vizes oldathoz hozzáadunk 120 ml diklórmetán, 60 ml etilacetát és 120 ml etanol elegyében oldott 4,2 g (40 mmól) (o-tolil)-fenildiazometánt, majd az elegy pH-ját 45 perc alatt, keverés közben ortofoszforsawal 2,0 értékre állítjuk be. Elválasztás után a szerves fázist 100 ml vízzel, 2 x 100 ml 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, majd 100 ml vízzel mossuk, megszárítjuk és vákuumban bepároljuk. A párlási maradékként kapott gumi-konzisztenciájú terméket 40—60 °C-os forráspontú petroléterrel kezelve 16,9 g fenti végterméket állíthatunk elő. 9. példa (6R,7R)-7-[R-5-karboxi-5-(3,5-dietoxikarbonil-2,6- -dimetil-1,4-dihidropiridin-l-il(-pentánamido]-3- -hidroximetil-cef-3-em-4-karbonsav-bisz-difenilmetilészter 12 g (20 mmól) 70%-os tisztaságú kálium-(6R,7R)-7-(R-5-amino-5-karboxipentánamido)-3-hidroximetil-cef-3-em-4-karboxilát oldatához két részletben, 1 óra alatt, 5 °C-on hozzáadunk 18,7 ml (249 mmól) 37%ros formaldehid-oldatot és 25,2 ml (199 mmól) ecetsavas etilésztert. Az adagolás közben az oldat pH-ját 25%-os káliumfoszfát-oldat segítségével 7,0 értéken tartjuk. Az elegyet 30 percen keres z tül keverjük, majd 200 ml diklórmetánnal extraháljuk. A vizes oldathoz ezután 10 g (52 mmól) difenildiazometánt tartalmazó 150 ml diklórmetánt adunk, majd az elegy pH-ját ortofoszforsawal 45 perc alatt, keverés közben 2,0 értékre állítjuk be. Elválasztás után a szerves fázist 200 ml vízzel, 200 ml 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, majd 200 ml vízzel mossuk, magnéziumszulfáton megszárítjuk és vákuumban 75 ml térfogatra bepároljuk. Dyen módon a végtermék oldatát kapjuk. 10. példa (6R,7S)-7-(R-5-benziloxikarbonilamino-5-karboxipentánamido)-3-karbamoiloximetil-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsav-bisz-difenilmetilészter 4 g kb. 5%-os tisztaságú (6R,7S)-7-(R-5-amino-5- -karboxipentánamido)-3-karbamoiloximetil-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsav-monoammóniumsó és 6 g nátriumhidrogénkarbonát 80 ml vízben készített oldatához 70 °C-on keverés közben, 1 óra leforgása alatt hozzáadunk 3,5 ml klórhangyasav-benzilésztert. Az adagolás közben az elegy pH-ját 1 n nátriumhidroxidoldat segítségével 7,8-8,0 értéken tartjuk, majd az elegyet - 7,8-8,0 pH-értéket biztosítva - további 90 percen keresztül 10 °C-on keverjük. Ezután az oldatot ortofoszforsawal pH=5-ig savanyítjuk és 2x 100 ml kloroformmal mossuk. A vizes fázishoz 50 ml etilacetátot, 10 ml etanolt és 50 ml kb. 0,2 M töménységű metilénkloridos difenildiazometán-oldatot adunk. Az elegyet 45 percen keresztül 15 °C-on keverjük, eközben pH-ját lassan 2,0 értékre állítjuk be ortofoszforsawal. Elválasztás után a szerves fázist 2 x 75 ml 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, majd 100 ml vízzel mossuk, nátriumszulfáton megszárítjuk és bepároljuk. A párlási maradékként kapott 2,9 gumi-konzisztenciájú anyagot szilikagéloszlopon történő kromatografálással, végül szilikagélrétegen preparatív vékonyrétegkromatográfiás úton tisztítjuk. Eluálószerként az előbbi esetben etilacetát-kloroform elegyet, az utóbbi esetben kloroform-metanol elegyet alkalmazunk. Az eljárásban kapott habkonzisztenciájú végtermék súlya 206 mg. A végtermék szerkezeti azonosságát infravörös és mágneses magrezonancia-spektroszkópiás vizsgálattal, továbbá elemanalízissel erősítettük meg. 11. példa (6R,7S)-7-[R-5 -karboxi-5 -(-2,2,2 -triklóretoxikarbonilamino)-pentánamido]-3-karbamoiloximetil-7- -metoxi-cef-3 -em-4-karbonsav-bisz-difenilmetilészter 3 ml klórhangyasav-2,2,2-triklóretiIésztert 1 óra alatt keverés közben beadagolunk 4 g kb. 5%-os tisztaságú (6R,7S)-7-(R-5-amino-5-karboxipentánamido)-3-karbamoiloximetil-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsav és 6 g nátriumhidrogénkarbonát 80 ml vízben készült 10 °C-os oldatába. Az adagolás közben az elegy pH- ját 1 n nátriumhidroxid oldat segítségével 7,8-8 értéken tartjuk, majd az elegyet további 90 percen keresztül - pH=7,8-8 értéket biztosítva - 10 °C-on keverjük. Az elegyet ezután ortofoszforsawal pH=5-ig savanyítjuk és az oldatot 2 x 100 ml kloroformmal mos suk. A vizes fázishoz 50 ml etilacetátot, 10 ml etanolt és kb. 50 ml kb. 0,2 M töménységű difenildiazometán-oldatot adunk. Az elegyet 30 percen kereszt il 15 °C-on keverjük, eközben pH-ját ortofoszforsawal 2 értékre állítjuk be. Elválasztás után a szenes fázist 2x80 ml 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, majd 100 ml vízzel mossuk, nátriumszulfát or megszárítjuk és bepároljuk. A párlási maradékként kapott 2,8 g gumi-konzisztenciájú terméket szilikagél-oszlopon történő kromatografálással, majd szilikagél-réteg alkalmazásával preparatív vékonyrétegkromatográ-14 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
